Utilisez les suspensions cellulaires obtenues après digestion des articulations du genou de souris et ensemencez la suspension sur le plat enrobé de collagène. Incuber le plat pendant une heure à 37 degrés Celsius dans une atmosphère humidifiée avec 5% de dioxyde de carbone. Après l’incubation, prélever les cellules non adhérentes à l’aide d’une pipette.
Lavez le plat enrobé de collagène avec un milieu de culture et recueillez le milieu. Ensuite, ajoutez un milieu frais au plat pour cultiver les cellules adhérentes qui présentent une morphologie fibroblastoïde. Traiter les cellules avec 0,05% de trypsine dans la solution saline équilibrée de Hank et faire passer les cellules sous-confluentes.
Si des cellules de type fibroblaste très pures sont nécessaires, effectuez des passages répétés. Assurez-vous d’utiliser des cellules avec moins de cinq passages. Des cellules semblables à des fibroblastes ont été isolées à partir de tissus arthritiques inflammatoires, induites chez des souris femelles C57BL/6 âgées de sept à huit semaines.
La pureté des cellules isolées a été évaluée par l’expression de l’ARNm RTQPCR de marqueurs de fibroblastes synoviaux, tels que Vcam1, Cdh11, Col6a1 et Csf1 dans les cellules isolées, ce qui suggère que les fractions riches en fibroblastes ont été isolées du tissu de la synovite.
