Avant de placer la souris anesthésiée sur l’insert d’imagerie en direct installé sur la platine du microscope inversé, enfilez le tube isoflurane avec le cône de nez attaché à travers le support de tube d’angle sur l’insert. Après avoir branché la plaque chauffante dans le contrôleur contenant une sonde de thermomètre anal attachée et l’avoir allumée, transférez la souris anesthésiée de la chambre d’induction sur la plaque chauffante. Fixez ensuite le cône de nez sur la souris.
Insérez la sonde anale dans l’animal et ajustez le contrôleur pour maintenir une température corporelle stable d’environ 36 degrés Celsius. Couvrez la souris correctement positionnée avec une pellicule plastique pour emprisonner la chaleur corporelle et élever la température corporelle. Positionnez la souris de manière à ce que sa tête s’aligne avec le disque coulissant et immobilisez son oreille au centre de la lamelle en verre à l’aide d’un clip d’oreille ou d’un ruban adhésif en métal.
Une fois l’imagerie terminée, sélectionnez l’option Low Flow sur le vaporisateur électronique pour arrêter l’administration d’isoflurane. Transférez la souris sur un coussin chauffant jusqu’à ce qu’elle devienne ambulatoire. Après avoir retiré le disque coulissant du couvercle, essuyez-le avec du papier pour lentilles et une solution pour lentilles.
Rangez-le correctement pour éviter les rayures et le réutiliser. Ensuite, détachez la tubulure d’anesthésie du support d’insertion et dévissez l’insert de la platine du microscope. Les empilements Z acquis de tissus auriculaires de souris vivantes marqués par fluorescence ont montré une dérive minimale des axes x, y et z au fil du temps, validant les inserts d’imagerie en direct imprimés en 3D personnalisés.
Les points temporels d’un film en accéléré de trois heures des cellules épidermiques de l’oreille de souris positives mCherry d’une souris mâle adulte ont révélé qu’un seul plan z restait net pendant la période prolongée. Des observations similaires ont été faites à partir d’un autre film en accéléré de trois heures de fibroblastes dermiques de l’oreille positifs à la GFP d’une souris femelle adulte.