Pour commencer, ouvrez l’application logicielle en double-cliquant sur l’icône d’un fichier exécutable. Saisissez les séquences de chaînes lourdes et de chaînes légères dans les zones de texte sous la colonne 1 sans espaces. Pour les anticorps bispécifiques, ajoutez des chaînes lourdes ou légères supplémentaires dans le deuxième ensemble de zones de texte sous la colonne 2.
Laissez ces cases vides pour les anticorps monoclonaux avec des chaînes lourdes et des chaînes légères identiques. Cochez les cases Cyclisation de la borne d’extrémité et Écrêtage de la borne C si ces variantes de bornes à chaîne lourde sont applicables. Ajouter des modifications chimiques, y compris l’agent de liaison et la charge utile pour les conjugués anticorps-médicaments, aux boîtes de modification chimique à chaîne lourde et légère en utilisant des compositions élémentaires telles que le chlorure de calcium.
Ces modifications seront ajoutées à la sous-unité ou à la chaîne protéique respective. Spécifiez le nombre de liaisons disulfure dans les molécules protéiques dans la zone de texte marquée Nombre total de disulfures. Entrez le nombre de liaisons disulfure de chaîne lourde non réduites dans la zone de texte disulfures de chaîne lourde non réduits et le nombre de liaisons disulfure de chaîne légère non réduites dans la zone de texte disulfures de chaîne légère non réduits en fonction de l’étendue de la réduction.
Si une glycosylation est présente sur la chaîne légère des anticorps monoclonaux, cochez la case La chaîne légère est glycosylée. Cliquez sur le bouton Parcourir pour sélectionner un dossier de sortie pour la zone de texte du dossier de sortie et entrez le nom du fichier de sortie sans extension de fichier dans la zone de texte Fichier Excel sans extension. Cliquez ensuite sur le bouton Envoyer.
Un message de création de rapport de calcul de masse s’affiche à l’écran et le fichier de sortie se trouve dans le dossier désigné par l’utilisateur. L’application se fermera automatiquement. Les compositions chimiques, les masses calculées, les masses mesurées et les erreurs de masse de divers anticorps monoclonaux sont résumées dans ce tableau.
Un anticorps monoclonal standard disponible dans le commerce a été sélectionné pour représenter un anticorps monoclonal conventionnel avec des chaînes lourdes identiques, des chaînes légères identiques et un site de glycosylation lié à l’azote dans la région FC. Un anticorps monoclonal avec une glycosylation supplémentaire liée à l’azote à chaîne légère, un anticorps monoclonal bispécifique et un anticorps monoclonal conjugué anticorps-médicament ont également été choisis pour élargir l’utilisation de l’application. Les petites erreurs de masse entre les masses calculées et les masses mesurées se situaient dans les critères d’acceptation des erreurs de masse normales, ce qui suggère que les masses calculées étaient exactes.
