Treatment of the Monocyte-Derived Dendritic Cells (Mo-DCs) with Sialidase

Recueillir environ 10 fois 10 à la sixième cellule dendritique dérivée du monocyte humain différenciée des monocytes. Des 10 puits de la plaque à 24 puits ayant 1,3 fois 10 à la sixième cellule par puits, transférez-les dans un nouveau tube conique stérile de 15 millilitres. Après avoir centrifugé les cellules à 300G pendant cinq à sept minutes à température ambiante, en utilisant la pause normale, jetez le surnageant pour éliminer les cellules mortes et les débris.

Ajouter 10 millilitres de milieu RPMI 1640 contenant 11,1 millimolaires de glucose dans le tube. Après avoir centrifugé à température ambiante pendant quatre minutes à 300 G, en utilisant la pause normale, jetez à nouveau le surnageant. Ajoutez deux millilitres de milieu RPMI 1640 à la pastille cellulaire et divisez un millilitre de la suspension cellulaire en deux nouveaux microtubes stériles étiquetés numéro un et numéro deux.

Pour le microtube un, ajoutez 500 milli d’unités de Sialidase de Clostridium perfringens. Incuber les deux tubes pendant 60 minutes à 37 degrés Celsius. Après l’incubation, transférez les cellules des deux microtubes dans de nouveaux tubes coniques de 15 millilitres étiquetés numéro un et numéro deux.

Ajoutez ensuite environ quatre millilitres de milieu complet RPMI 1640 contenant 10 % de FBS dans chaque tube conique. Centrifugez les tubes à température ambiante pendant quatre minutes à 300G en utilisant la pause normale et ajoutez cinq millilitres de milieu complet RPMI 1640 à la pastille. Plaquer un millilitre de cellules par puits.

L’efficacité du traitement par la Sailidase pour réduire la teneur en acide sialique à la surface des cellules dendritiques dérivées de monocytes humains a été évaluée par cytométrie en flux et microscopie confocale. Le traitement par la saïdidase a significativement diminué la liaison de la lectine de Maackia Amurensis et de la lectine de Sambucus nigra tout en augmentant la coloration de la lectine de l’agglutinine de l’arachide. La diminution de la coloration de la lectine de Sambucus nigra après le traitement par Sailidase a montré une réduction significative de la coloration de la lectine de Sambucus nigra à la surface de la cellule.