Pour préparer une barre de tête en forme d’oméga pour l’appuie-tête du poisson-zèbre, fixez un morceau de pâte à modeler à base d’huile à un micro-manipulateur à trois axes. Insérez ensuite un bras de la barre de tête dans l’argile et orientez la barre de tête horizontalement. Préparez le canon pour maintenir le corps du poisson en place pendant l’opération.
Pour enlever l’excès de peau et d’eau des sites d’attache du crâne, préparez quatre écouvillons de tissus en coupant une serviette en papier dans un carré de trois centimètres. Pliez ensuite les carrés de papier le long de leur diagonale pour produire une structure en forme de tube et torsadez les extrémités du tube en une pointe fine. Après avoir anesthésié le poisson avec 0,03 % de TMS, effectuez une perfusion à la seringue avec 0,01 % de TMS pour maintenir la sédation tout au long de la procédure.
Enveloppez le poisson dans un tissu en papier humide en commençant par le bout de la queue jusqu’à environ un millimètre caudal jusqu’à la branchie. Enroulez ensuite un tube en plastique souple avec une fente longitudinale autour du tissu en papier recouvrant le poisson de l’extrémité de la queue jusqu’à environ deux millimètres caudaux jusqu’à la branchie. Enroulez l’essuie-tout autour du tube.
Enroulez ensuite un tube en plastique souple découpé dans l’ampoule d’une pipette de transfert en plastique autour de l’essuie-tout. Chargez le poisson emballé dans le canon. Ensuite, à l’aide d’un scalpel, retirez la peau recouvrant les sites d’attache, deux zones triangulaires du crâne rostrolatérales au cervelet et au-dessus des branchies.
Ensuite, utilisez des écouvillons de tissu pour sécher les sites de fixation et nettoyer toute peau restante. À l’aide d’un embout de pipette de 10 microlitres, appliquez une goutte de colle tissulaire au centre de chaque site de fixation. Placez le corps du poisson en position verticale et positionnez la barre de tête légèrement au-dessus et caudale par rapport aux sites d’attache.
Ensuite, préparez le ciment dentaire en mélangeant une petite cuillère de polymère avec quatre gouttes de monomère rapide et une goutte de catalyseur cinq. Remuez le mélange uniformément pendant 15 secondes. Immédiatement après le mélange, utilisez une micropipette et un embout de pipette de 10 microlitres pour appliquer le ciment sur les sites de fixation et la région entre les sites.
Ensuite, à l’aide d’un micro manipulateur, appuyez doucement la barre de tête sur le ciment. Couvrir la barre de tête avec le reste de ciment et attendre 12 minutes pour permettre le durcissement du ciment. Ensuite, pour améliorer l’accès optique au cerveau antérieur pour l’imagerie calcique, utilisez un scalpel pour enlever la peau au-dessus du télencéphale.
Après durcissement, retirez l’argile de la barre de tête. Ensuite, préparez un module de chargement de poisson pour le micro-manipulateur. Transférez ensuite l’ensemble de la capsule du canon vers le dispositif de réglage du pas dans le module de chargement du poisson.
À l’aide du micro manipulateur, positionnez le poisson avec la barre de tête placée au-dessus des poteaux métalliques de la platine de tête. Augmentez légèrement l’angle de tangage du poisson. Appliquez de la colle durcissable aux ultraviolets pour fixer la barre de tête aux poteaux métalliques.
Retirez ensuite le poisson de la capsule et verrouillez la platine de tête sur la plaque de base à l’intérieur du réservoir semi-hexagonal. Après la chirurgie, plongez l’animal dans l’eau de l’aquarium pour récupérer de l’anesthésie.
