Allumez le laser et attendez 30 minutes pour que l’alimentation se stabilise. Réglez la longueur d’onde sur 920 nanomètres et la puissance sur environ 50 milliwatts à l’échantillon. Placez la chambre d’enregistrement avec le poisson-zèbre à tête attachée sur la plate-forme expérimentale.
Positionnez la lentille de l’objectif près de la surface du cerveau antérieur. Pour l’enregistrement du comportement, allumez les lumières infrarouges de 810 nanomètres des deux côtés du réservoir. Sélectionnez la source d’entrée pour l’affichage VR et commencez à enregistrer les données.
Ensuite, ouvrez l’obturateur laser et activez le tube photomultiplicateur. Élevez progressivement le cristallin jusqu’à ce que le cerveau antérieur dorsal soit révélé. Utilisez un actionneur piézoélectrique pour acquérir des images à plusieurs profondeurs afin d’augmenter le nombre de neurones enregistrés.
L’imagerie calcique à deux photons enregistre l’activité des neurones individuels dans le cerveau antérieur dorsal jusqu’à 200 microns de profondeur à travers des crânes intacts. La gamme d’imagerie comprend les zones paléo, Dm, cDc, rDc, et une partie de la Dl couvrant 30% du cerveau antérieur du poisson-zèbre adulte. L’enregistrement comportemental simultané effectué lors de l’imagerie cérébrale permet d’identifier les corrélats neuronaux des sorties motrices.
Pendant l’imagerie, les mouvements de la queue ne doivent pas provoquer d’artefacts de mouvement visibles.
