Commencez par préparer un poinçon de biopsie de 3,5 millimètres de diamètre. Marquez un point sur l’arbre de poinçon à cinq millimètres distaux du bord. Fixez le poinçon et utilisez un outil rotatif à deux vitesses pour couper la section distale marquée de l’arbre.
Coupez la tige à une profondeur de 3,5 millimètres, en laissant les 1,5 derniers millimètres attachés, et pliez la pointe à 90 degrés. Ensuite, préparez le PBS dans 900 millilitres d’eau distillée et ajustez le pH à 7,4. Amenez ensuite la solution à un volume final d’un litre en ajoutant de l’eau distillée.
Préparez une solution d’aldéhyde à 4 % de paraforme en dissolvant deux grammes d’aldéhyde de paraforme dans 45 millilitres de PBS sous une hotte chimique et en la chauffant à 65 degrés Celsius tout en ajustant le pH à 7,4. Une fois que l’aldéhyde paraforme est complètement dissous, ajustez le volume final de la solution à 50 millilitres. Pesez la souris pour déterminer le volume correct du cocktail anesthésique injectable à administrer.
Une fois l’anesthésie administrée, positionnez la souris sur la table d’opération, en respectant les principes standard de la chirurgie des rongeurs. Placez ensuite un oreiller de cinq millimètres de haut sous la tête du rongeur en position de décubitus latéral. Séchez soigneusement la surface oculaire à l’aide d’une lance chirurgicale et coupez soigneusement les cils.
Ajustez le microscope chirurgical pour une vue optimale de la souris anesthésiée et réglez la minuterie sur 30 secondes. Examinez ensuite la circonférence de la zone limbique à l’aide du microscope chirurgical tout en gardant les paupières de la souris grandes ouvertes à l’aide du pouce et de l’index. Maintenant, tenez soigneusement la tréphine de poinçon stérilisée parallèle à l’axe des yeux sans appliquer de pression vers le bas.
Évitez de faire tourner l’instrument et maintenez l’axe de la tréphine de poinçon parallèle à l’axe du globe. Demandez à l’assistant chirurgical de placer trois gouttes de solution d’hydroxyde de sodium dans le trou des tréphines de poinçonnage. Après 30 secondes, nettoyez la cornée et le fornix à l’aide de cinq millilitres de PBS.
Ensuite, utilisez un papier indicateur de pH universel pour assurer une valeur de pH comprise entre 7 et 7,5 sur la surface cornéenne de l’œil blessé. Après l’intervention, lavez, séchez et désinfectez la tréphine à poinçon et la table d’opération avec 70 % d’éthanol. Examinez les yeux d’une souris anesthésiée sous un biomicroscope à lampe à fente et utilisez un appareil photo pour capturer des images.
Appliquez ensuite des gouttes ophtalmiques fluorescentes à 0,1 % et imbibez l’excédent de liquide fluorescent avec un applicateur en coton. Évaluez la présence possible d’anomalies épithéliales cornéennes à l’aide du filtre bleu cobalt et prenez des photos. Ensuite, appliquez la pommade ophtalmique triple antibiotique sur la surface oculaire endommagée.
Nucléer l’œil tout en préservant la caroncule médiale et l’ensemble de la conjonctive palpable. Au microscope chirurgical, disséquez délicatement la jonction entre la caroncule et la peau. À l’aide d’une pince dentaire, rétractez la caroncule et aidez à guider les ciseaux chirurgicaux sous la conjonctive palpable, en direction de sa jonction avec la plaque tarsienne.
Coupez la conjonctive le long de la ligne d’adhérence vers le canthus latéral. Tournez ensuite les ciseaux chirurgicaux jusqu’à la jonction de la conjonctive et de la plaque tarsienne inférieure au niveau du plan sous-conjonctival. Rétractez maintenant les paupières supérieures et inférieures du côté nasal à l’aide du pouce et de l’index.
Tout en vous rétractant, guidez la pointe de la pince à épiler à pointe incurvée derrière la glande lacrymale saillante, en vous déplaçant vers le nerf optique. Saisissez fermement le nerf optique et extrayez le globe. Plus tard, rincez le globe avec du PBS et transférez-le dans la solution de fixation.
Le processus de cicatrisation de l’œil de la souris après une lésion alcaline cornéenne et limbique dans un modèle murin est illustré. L’œdème cornéen est important aux jours zéro et deux, tandis que la fibrose est plus évidente au cours de la deuxième semaine suivant la lésion. L’anomalie épithéliale guérit par migration des cellules épithéliales conjonctivales selon un schéma centripète en 12 à 14 jours.
Cependant, 50 % des yeux blessés ont développé des anomalies épithéliales persistantes à la fin de la deuxième semaine.
