Préparation d’une lentille de poulet pour micro-injection d’un rétrovirus RCAS(A)

Pour commencer, fixez le capillaire en verre borosilicaté aux clips rembourrés en caoutchouc de l’extracteur de micropipette vertical manuel. Réglez la température de chaleur de l’extracteur de micropipette à 950 degrés Celsius et effectuez un pré-tirage pour obtenir un capillaire en verre plus fin et plus doux. Réglez ensuite la température de chauffage à 790 degrés Celsius et effectuez un tirage secondaire pour produire les micropipettes finales.

À l’aide d’une meuleuse à micropipettes, affûtez soigneusement l’ouverture de la pointe à un diamètre extérieur de 11 micromètres. Placez ensuite les micropipettes dans un tampon de serrage éponge à l’intérieur d’un bocal en verre. Incuber les œufs de poule fécondés jusqu’au stade de développement 18 dans un incubateur à bascule humidifié à 37 degrés Celsius.

Essuyez soigneusement la zone de travail avec de l’éthanol à 70 %. Après le développement, retirez les œufs de l’incubateur. Vaporisez les œufs avec de l’éthanol à 70 % et laissez-les sécher à l’air libre.

Placez ensuite l’œuf sur un porte-œuf avec l’extrémité la plus grande vers le haut. À l’aide d’une pince dentée tranchante, tapotez délicatement sur la plus grande extrémité de la coquille d’œuf pour créer un trou de deux centimètres de diamètre. Retirez ensuite les fragments de la coquille de l’œuf.

Placez l’œuf sur une platine de microscope à dissection et localisez l’embryon. Ensuite, utilisez la pince à dissection fine et les ciseaux pour couper la membrane amniotique recouvrant le haut de l’embryon. Placez ensuite une boîte de Pétri de 60 millimètres sur l’ouverture de l’œuf.