Homogénéisez l’échantillon de corail avec un homogénéisateur mécanique en dents de scie pendant une minute jusqu’à ce que l’échantillon soit complètement homogénéisé et qu’aucun amas ne soit visible. Pour la normalisation, prélever une aliquote d’un millilitre dans le tissu homogénéisé pour le comptage des cellules Symbiodiniaceae, l’analyse de la teneur en protéines des tissus coralliens et l’estimation de la chlorophylle-A. Si vous séparez le matériel hôte et les cellules d’algues, centrifugez l’homogénat de corail restant à 2 500 g pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius.
Transvaser le surnageant contenant le matériau hôte dans un nouveau tube de 15 millilitres. Ajoutez deux millilitres d’eau froide ultrapure à la pastille d’algues et au vortex à la fois le matériau hôte et la pastille d’algues pendant deux minutes pour les remettre en suspension. Centrifuger à nouveau tous les échantillons et transférer le surnageant contenant le matériau hôte dans un nouveau tube de 15 millilitres.
Après avoir éliminé le surnageant de la pastille d’algue, conservez-la dans le tube d’origine de 15 millilitres. Soufflez soit l’homogénat d’holobionte, soit l’hôte séparé dans les fractions de Symbiodiniaceae à moins 80 degrés Celsius pendant au moins deux heures. Ensuite, lyophiliser les échantillons pendant la nuit avec un vide de 0,01 millibar à moins 85 degrés Celsius.
Après séchage, peser chaque échantillon sur une balance de laboratoire dans des tubes de microcentrifugation séparés de deux millilitres, sans plastifiant. La visualisation microscopique n’a révélé aucune cellule de Symbiodiniaceae dans les échantillons de tissus de l’hôte après trois étapes de lavage. De même, un minimum de tissu hôte a été trouvé dans les fractions symbiotiques.
Cependant, l’homogénat d’holobionte indiquait que les Symbiodiniaceae intracellulaires n’avaient pas été libérées de leurs symbiosomes par simple aérographe.
