Pour extraire les métabolites intracellulaires de l’holobionte lyophilisé, ajoutez 400 microlitres de méthanol 100% froid avec des étalons internes à l’holobionte lyophilisé. Ajoutez ensuite 10 milligrammes de billes de verre lavées à l’acide et placez le tube dans un broyeur à billes pré-refroidi. Insérer à 50 hertz pendant trois minutes.
Après la lyse, ajoutez 600 microlitres de méthanol froid et de vortex pendant une minute. Placez le tube sur un shaker de rôtissoire à quatre degrés Celsius pendant 30 minutes. Pour extraire les métabolites des cellules de symbiodiniacae lyophilisées séparées, ajoutez 200 microlitres de méthanol froid avec des étalons internes aux cellules de symbiodiniacae séchées.
Ajoutez ensuite des billes de verre lavées à l’acide et placez le tube dans un insert de broyeur à billes pré-refroidi à 50 hertz. Après trois minutes, ajoutez 800 microlitres de méthanol et de vortex pendant 30 secondes. Pour l’extraction des métabolites à partir de tissus hôtes lyophilisés séparés, ajoutez un millilitre de méthanol froid contenant des étalons internes au matériau hôte séché et au vortex pendant 20 secondes.
Placez ensuite le tube dans un support de tube flottant pour une sonication à quatre degrés Celsius pendant 30 minutes. Ensuite, pour la purification de l’extrait de métabolite, centrifugez tous les échantillons à 3000G pendant 30 minutes à quatre degrés Celsius. Transférez délicatement le surnageant dans un nouveau tube micro-centrifuge de deux millilitres sans perturber la pastille.
Remettre la pastille en suspension dans un millilitre de méthanol froid à 50 % et tourbillonner vigoureusement pendant une minute. Centrifugez à nouveau, puis collectez et regroupez les extraits polaires surnageant avec les extraits semi-polaires du même échantillon. Centrifuger les extraits regroupés à 16, 100G pendant 15 minutes pour éliminer les précipités.
Pour l’analyse, aliquote 50 microlitres de chaque extrait dans un insert en verre et concentré à l’aide d’un concentrateur sous vide pendant 30 minutes à 30 degrés Celsius. L’analyse du GCMS a révélé 107 métabolites annotés dans tous les traitements, y compris une série d’acides aminés, d’acides organiques, de glucides, d’acides gras et stériles. K signifie que le regroupement a permis d’identifier trois groupes distincts d’échantillons.
Les échantillons d’holobiontes étaient intermédiaires entre les fractions séparées de l’hôte et du symbiote. Bien que K signifie que les distributions d’agrégats, les coordonnées parallèles et la visualisation de la carte thermique dans l’abondance relative des métabolites indiquent que le profil de l’holobionte correspond plus étroitement au profil de la fraction de l’hôte différait significativement des profils de l’hôte et du symbiote. Les profils de l’hôte et du symbiote étaient significativement distincts l’un de l’autre avec 100 métabolites individuels, significativement différents entre les fractions de l’hôte et du symbiote.
