Commencez par maintenir les mouches à une température de 25 degrés Celsius, dans des flacons étroits remplis de nourriture standard pour drosophiles. Allumez le bain-marie et ajustez la température selon vos besoins. Utilisez une lingette de laboratoire pulvérisée avec de l’éthanol à 70 % pour nettoyer les joints en verre dépoli des chambres et des bouchons des capteurs, puis utilisez une nouvelle lingette pour éliminer tout éthanol restant.
Ensuite, placez un morceau d’un centimètre d’un rouleau de coton, imbibé d’eau purifiée, au fond de la chambre pour créer un environnement stable et humide. Ajoutez suffisamment d’eau pour former une modeste mare à la base du rouleau de coton. Assurez-vous que le joint de la chambre est sec en essuyant l’eau renversée.
Transférez soigneusement les mouches dans des tubes en polypropylène étiquetés à l’aide d’un entonnoir et bouchez les tubes avec un rouleau de coton. Maintenant, ajoutez un tube ventilé contenant des mouches dans chaque chambre de respiromètre. Remplissez les cartouches de chaux sodée et positionnez-les en haut du tube qui contient les mouches à l’intérieur de la chambre.
Remplissez ensuite les générateurs d’oxygène avec une solution saturée de sulfate de cuivre, en veillant à ce que le niveau reste en dessous des trous d’aération. Connectez le générateur d’oxygène rempli au connecteur à deux broches situé sur la fiche du capteur. Placez deux petites noisettes de graisse silicone transparente sur les côtés opposés du joint en verre dépoli de la fiche du capteur.
Insérez le bouchon dans la chambre et tournez-le doucement avec une pression modérée pour répartir uniformément la graisse dans le joint. Essuyez tout excès de graisse à l’aide d’une lingette de laboratoire. Fixez ensuite les bouchons de la chambre en enclenchant les pinces en plastique.
Placez les chambres assemblées dans une grille au bain-marie, en vous assurant que les robinets d’arrêt sont ouverts. Maintenez les robinets d’arrêt en position ouverte et laissez les chambres s’équilibrer pendant environ 30 minutes. Assurez-vous que les interrupteurs fournissant du courant aux générateurs d’oxygène sont éteints.
Connectez les contrôleurs aux chambres du respiromètre à l’aide des câbles à six conducteurs et vérifiez que les affichages des diodes électroluminescentes organiques sur les contrôleurs affichent activement les paramètres environnementaux. Activez maintenant les générateurs d’oxygène à l’aide de l’interrupteur du contrôleur. Une fois que la valeur actuelle passe de zéro à entre 35 et 55 milliampères, le contrôleur et la chambre sont prêts pour les expériences.
Après avoir éteint les générateurs d’oxygène, identifiez les ports de communication utilisés par les contrôleurs. Ouvrez le logiciel PuTTY sur le bureau et configurez un fichier journal pour chaque canal du respiromètre en sélectionnant le port de communication du contrôleur en entrant le numéro de ce port dans la zone de ligne série. Cliquez ensuite sur Journalisation.
Choisissez la sortie principale dans la journalisation de session et, sous le nom du fichier journal, cliquez sur Parcourir. Dans le dossier choisi, créez un nom de fichier contenant des informations descriptives. Cliquez ensuite sur Enregistrer.
Cliquez sur Ouvrir et une fenêtre affichant les données délimitées courantes en cours d’enregistrement s’ouvrira. Répétez ce processus pour tous les autres contrôleurs utilisés. Chaque entrée de port de communication sera affichée dans une fenêtre séparée.
Après avoir équilibré les chambres pendant 30 minutes, fermez-les en fermant les robinets. Couvrez le bain et les chambres avec une boîte en mousse de polystyrène pour créer un environnement stable et équilibrer pendant une heure. Initiez le courant vers le générateur d’oxygène de chaque chambre à l’aide de l’interrupteur situé sur le boîtier de contrôle.
Une fois les générateurs d’oxygène activés, vérifiez que la pression augmente jusqu’à la pression d’arrêt prédéfinie. Après l’expérience, éteignez les générateurs d’oxygène de tous les contrôleurs et ouvrez les robinets d’arrêt pour desceller les chambres. Laissez les fenêtres PuTTY rester ouvertes pendant cinq à 15 minutes pour établir une ligne de base finale, puis terminez les enregistrements en fermant la fenêtre PuTTY pour chaque contrôleur.
Débranchez les capteurs des câbles et transportez les chambres vers le rack sec. Un par un, retirez les bouchons des capteurs des chambres. Débranchez les générateurs d’oxygène et placez-les soigneusement dans le porte-tubes.
Essuyez ensuite la graisse de la fiche du capteur et replacez-la dans le rack. Nettoyez la graisse des joints de la chambre et retirez les tubes contenant des mouches et de la chaux sodée. Enfin, enregistrez le poids et le nombre de mouches pour chaque tube.
Les données quantitatives sur la consommation d’oxygène pour les mouches mutantes delta 18 de type sauvage et de fût ont montré que la consommation d’oxygène spécifique de masse n’était pas significativement différente entre les témoins de type sauvage et les mutants delta 18 de fût. La consommation d’oxygène analysée par mouche a montré que la consommation d’oxygène était significativement réduite dans le fût delta 18 par rapport aux témoins de type sauvage. Cependant, la masse moyenne des mouches delta 18 en fût était inférieure à celle des témoins de type sauvage.
