Pour commencer, plaquez la tumeur maligne de la gaine nerveuse périphérique maligne à 80% ou les cellules MPNST à une densité de 1200 cellules par puits dans des plaques à 96 puits à paroi noire. Après avoir préparé les dilutions du médicament à tester, ajoutez chaque dilution ou véhicule à au moins trois cellules répliquées. Pour évaluer le nombre direct de cellules, ajoutez le canular 33342, jusqu’à une concentration finale d’un à cinq microgrammes par millilitre dans les plaques.
Et incubez les plaques pendant 30 minutes à 37 degrés Celsius. Placez les plaques sur un cytomètre d’imagerie à haut débit et scannez les plaques à l’aide de l’option de numération cellulaire directe pour le nombre total de cellules avec des temps d’exposition de 100 000 à 600 000 millisecondes. Analysez les lectures à l’aide du logiciel, exportez-les dans une feuille de calcul et utilisez un logiciel approprié pour les analyses statistiques.
