Pour commencer, placez la tranche de moelle épinière préparée dans la chambre d’enregistrement. Placez ensuite l’anode du système de micro-manipulation près de la ligne médiane dorsale dans la cathode près de la zone d’entrée de la racine dorsale pour un positionnement correct du stimulateur de la moelle épinière. Passez maintenant à une lentille d’objectif 60X pour identifier un neurone sain ayant une surface lisse et brillante sans noyaux visibles.
Diminuez légèrement l’intensité infrarouge, allumez la source de lumière fluorescente et ajustez le filtre de lumière à l’option d’excitation ultraviolette à large bande. Maintenant, sélectionnez un motoneurone Fluoro-Gold positif approprié et abaissez progressivement l’électrode jusqu’à ce qu’elle soit proche du neurone. Lorsque la pipette entre en contact avec sa surface, recherchez une petite indentation de membrane au niveau de la pointe et relâchez la pression positive précédemment appliquée.
Appliquez ensuite une pression négative sur la pipette à l’aide d’une seringue et attendez que la valeur de résistance atteigne des gigaohms sur l’interface logicielle. Fixez le potentiel de membrane à moins 70 millivolts. Appuyez sur le bouton de compensation de capacité rapide sur l’interface logicielle de l’amplificateur, puis appliquez une brève pression négative pour rompre la membrane cellulaire et appuyez sur le bouton de compensation de capacité lente sur l’interface logicielle de l’amplificateur.
Appliquez la stimulation de la moelle épinière pendant une à deux secondes en maintenant l’amplitude entre un et 10 milliampères. Déterminer le seuil moteur en augmentant progressivement l’amplitude de stimulation jusqu’à ce que le premier potentiel d’action soit observé. Distinguer les motoneurones à déclenchement retardé et immédiat à l’aide d’une injection de courant dépolarisant de cinq secondes autour de la rhéobase en mode de pince de courant.
Après avoir désactivé la stimulation de la moelle épinière, continuez à enregistrer les potentiels membranaires pour capturer les potentiels d’action spontanés qui se déclenchent. Lorsque l’amplitude de la stimulation de la moelle épinière a été augmentée, le potentiel membranaire a été augmenté et les potentiels d’action ont été déclenchés toutes les 10 à 20 impulsions. Après l’arrêt de la stimulation de la moelle épinière, le neurone a déclenché une série de potentiels d’action spontanés pendant une courte période de temps.
Ensuite, le potentiel de membrane au repos est revenu à moins 65 millivolts.
