Pour commencer à préparer les grilles de microscopie électronique pour la cryotomographie cellulaire, placez la grille, chargée d’un film de support en carbone perforé, dans un dispositif de décharge luminescente avec le côté carbone de la grille vers le haut. Ensuite, déchargez la grille à 15 milliampères, sous une pression atmosphérique de 0,39 millibar pendant 45 secondes. Une fois cela fait, placez la grille dans un récipient propre, tapissé de papier filtre.
Ensuite, transférez la grille avec la fibronectine, la solution saline tamponnée au phosphate ou le PBS, les plaques et la pince à épiler dans une enceinte de sécurité biologique. À l’aide d’une micropipette, coulez deux points de fibronectine bovine de taille généreuse sur une surface stérile comme un couvercle d’assiette à six puits. Assurez-vous que les points sont suffisamment grands pour envelopper toute la grille.
Ensuite, procurez-vous une pince à épiler de cinq par 15 et traitez les deux côtés de la grille avec la solution d’adhérence à la fibronectine. Une fois traitée avec de la fibronectine bovine, la grille deviendra collante. Touchez doucement la surface non carbonée de la grille au fond d’un puits vide dans une plaque à six puits et relâchez la pince à épiler pour fixer la grille à la nouvelle surface.
Ensuite, incubez la grille pendant 30 minutes dans la solution d’adhérence à la fibronectine. Pour éviter que les grilles ne sèchent, ajoutez une à deux gouttes de solution d’adhérence sur le dessus des grilles, à l’aide d’une micro-pipette toutes les 15 minutes. Après l’incubation, retirez l’excès de solution d’adhérence à l’aide d’une micro pipette.
Lavez les grilles en ajoutant des gouttes de PBS directement sur les grilles, à l’aide de la micro-pipette deux à trois fois. Stérilisez les grilles sous lumière UV dans une enceinte de sécurité biologique pendant une heure. Positionnez les grilles le plus près possible des UV pour une stérilisation maximale.
Empêchez les grilles de sécher pendant la stérilisation en micro-pipetant une à deux gouttes de PBS sur le dessus de la grille toutes les 10 minutes.
