Pour commencer l’ensemencement des cellules, comptez les cellules après les avoir détachées à l’aide de méthodes mécaniques ou enzymatiques. À l’aide d’une micropipette, ajoutez le nombre calculé de cellules par puits dans la plaque à six puits contenant des grilles de microscopie électronique pré-préparées tout en évitant les bulles. Assurez-vous de maintenir 1,5 à 2,0 millilitres de suspension cellulaire par puits.
Pour la transfection de clones moléculaires du VIH, incuber les cellules pendant 16 à 24 heures à 37 degrés Celsius. Ajoutez 50 microlitres de DMEM sans sérum et un microgramme d’ADN dans un microtube à centrifuger propre. Pour chacun, bien diluer trois microlitres de réactif de transfection dans du DMEM sans sérum dans un tube de micro-centrifugation propre séparé.
Homogénéiser le mélange séparément à l’aide d’une micro pipette. Ajoutez ensuite le mélange de réactifs de transfection au mélange d’ADN à l’aide d’une micro-pipette et incubez pendant 15 minutes à température ambiante. Après cela, ajoutez 100 microlitres du réactif de transfection et du mélange d’ADN goutte à goutte dans chaque puits directement au-dessus des grilles.
Remplacez le milieu de culture 16 à 24 heures après la transfection. 24 heures après la phase de co-transfection, comme la microscopie et la microscopie fluorescente, ont montré que toutes les grilles présentaient une déchirure minimale dans la couche de carbone. Les cellules des grilles fictives et des grilles co-transfectées contenaient des cellules viables dans plusieurs carrés de grille.
