Pour commencer, centrifugez les cellules CD34 positives isolées et remettez en suspension la pastille cellulaire dans 300 microlitres de milieu SFM-34 préchauffé qui est complété par 4 cytokines mélangées, et comptez les cellules à l’aide de 10 microlitres de la suspension cellulaire. Après avoir compté et remis en suspension les cellules dans un volume final de 150 microlitres de SFM-34 supplémenté en cytokines, ajoutez-y 0,5 microlitre d’inhibiteur de ROCK. Aspirez lentement la laminine des copeaux fluidiques en plaçant la pointe d’une pipette P200 à l’intérieur du réservoir sur le bord du canal.
Ajoutez ensuite la suspension cellulaire dans le canal de manière cohérente, en veillant à ce qu’aucune bulle ne se forme. Incubez la puce pendant la nuit à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone pour fixer complètement les cellules au canal. Lorsque les cellules endothéliales sont complètement attachées, aspirez le milieu comme décrit précédemment.
Ajoutez 200 microlitres de SFM-34 supplémenté en cytokines dans la puce. Remplacez le milieu quotidiennement jusqu’à ce que les cellules atteignent 90 à 100 % de confluence.
