Installez le set de perfusion dans l’appareil selon le protocole du fabricant. À l’intérieur d’une hotte, fixez-y une puce fluidique vide et ajoutez un milieu SFM-34 supplémenté en cytokines pour remplir les deux réservoirs dans des conditions stériles. Transférez l’unité fluidique dans l’incubateur, en la connectant à la pompe pour l’élimination des bulles et l’étalonnage.
Retirez avec précaution l’unité fluidique avec l’ensemble connecté de l’incubateur et transférez-la dans la hotte avec les copeaux contenant les cellules. Fixez le tube des deux côtés de la puce de test. Retirez le tube serré de la puce de test et connectez la puce contenant les cellules au tube.
Après avoir retiré ou ouvert les pinces, transférez le système dans l’incubateur et connectez la pompe à air à l’unité fluidique. Retirez l’unité fluidique de la pompe et déplacez-la dans la hotte. Fixez le tube des deux côtés de la puce et retirez le tube des réservoirs de la puce.
Après avoir délicatement retiré le milieu de la puce, lavez les cellules avec la solution saline tamponnée au phosphate ou DPBS de Dulbecco. Ajouter 150 microlitres de tampon de dissociation et incuber pendant trois minutes à 37 degrés Celsius. Lorsque les cellules sont détachées, récupérez le tampon de dissociation d’un réservoir et lavez le canal une fois avec DPBS.
Lavez le réservoir avec le tampon de lavage pour récupérer les cellules restantes de la puce. Enfin, ajoutez un millilitre de tampon de lavage aux cellules collectées avant d’en utiliser 10 microlitres pour compter les cellules. Avant la stimulation, les cellules présentaient une orientation aléatoire, mais avec la stimulation, elles se réorientaient parallèlement à la direction du flux.
Le profil d’expression de CD34 des cellules cultivées sous flux pendant cinq jours et le pourcentage de cellules CD34 positives prélevées dans le canal fluidique ont montré l’efficacité du protocole.
