Pour commencer, retirez les poils de la zone précordiale de la souris anesthésiée à l’aide d’une crème dépilatoire et positionnez la souris dos vers le bas sur la plateforme de surveillance physiologique. Appliquez une petite quantité de gel conducteur sur la feuille de cuivre sur la table de surveillance physiologique. Fixez la pause de la souris sur ce gel pour faciliter la capture de l’électrocardiogramme et des données respiratoires.
Appliquez une petite quantité de gel de transmission d’ultrasons pour assurer une qualité d’image optimale. Alignez la plate-forme latéralement à un petit angle entre la sonde et la plate-forme, et obtenez une vue parasternale du grand axe du cœur. Ensuite, localisez la section cardiaque appropriée en mode B.
Activez le Doppler couleur sur l’écran tactile et déplacez légèrement la sonde pour trouver la bonne position. Maintenant, passez en mode Pulse Wave en appuyant sur le bouton correspondant. Positionnez la ligne indicatrice jaune sur l’artère coronaire parallèlement à la direction de l’écoulement et appuyez sur le bouton Enregistrer le clip pour documenter les données de base.
Augmentez la concentration d’isoflurane à 3 % et attendez 30 secondes. Assurez-vous que la vitesse d’écoulement augmente progressivement avec le temps. Appuyez à nouveau fréquemment sur le bouton Enregistrer le clip pour capturer le flux sanguin à sa vitesse la plus élevée.
Une fois l’imagerie échocardiographique terminée, retirez soigneusement l’animal de la plate-forme. Utilisez les outils de fonction de vitesse de pointe pour mesurer les vitesses diastoliques de pointe et évaluer la fonction systolique du cœur à l’aide des images acquises. Calculez le CFR en divisant la vitesse de pointe du flux coronarien diastolique au débit maximal par la vitesse du flux coronaire du pic diastolique au départ.
Effectuez une thoracotomie sur le quatrième espace intercostal pour exposer le cœur. Ensuite, ligaturez l’artère LAD à l’aide d’une suture en soie 5-0. Vérifier l’ischémie chez la souris par confirmation visuelle de la visualisation de la décoloration en aval du myocarde ischémique.
Effectuez une occlusion de l’artère LAD pendant 30 minutes. Ensuite, relâchez la ligature et confirmez la reperfusion en surveillant la rougeur de la zone décolorée du muscle cardiaque pendant une à deux minutes. Après l’occlusion coronaire et la reperfusion, fermez la poitrine en couches et laissez les souris récupérer pendant environ une demi-heure.
Mesurez à nouveau le taux de létalité 1, 3, 5, 8, 24 et 48 heures après la reperfusion, comme démontré précédemment. Avant la chirurgie de reperfusion d’ischémie, la référence du taux de létalité a été mesurée et les souris avaient une valeur normale de taux de létalité. Cependant, après l’opération, il y a eu une diminution notable du taux de létalité après une heure de reperfusion.
Au fur et à mesure que la période de reperfusion était prolongée, les valeurs de létalité restaient constamment faibles, ce qui suggère que l’hypoperfusion pourrait persister pendant au moins deux jours. Aucun changement significatif n’a été observé dans la fonction cardiaque ventriculaire gauche lorsque le taux de létalité était significativement réduit chez les souris.
