Pour commencer, placez les échantillons de caillots sanguins cérébraux prélevés sur un plat propre à l’aide d’une pince à épiler. Ensuite, à l’aide d’une pipette, ajoutez-y cinq millilitres de sérum physiologique et secouez doucement le plat. Retirez le sérum physiologique à l’aide d’une pipette.
À l’aide d’une paire de ciseaux, coupez les caillots en petits morceaux. Encore une fois, ajoutez cinq millilitres de solution physiologique aux caillots et secouez doucement le plat avant d’aspirer la solution saline avec une pipette. Ensuite, à l’aide d’une pince à épiler, transférez les morceaux de caillots sur une nouvelle plaque en U propre.
Préparez la solution de travail SFE en ajustant la concentration de SFE à 2 000 unités par millilitre à l’aide d’une solution saline physiologique. Ajouter 300 microlitres de la solution de travail SFE aux caillots prétraités. Pour amorcer le premier cycle de dégradation, incubez le mélange de SFE et de caillots à 37 degrés Celsius pendant une demi-heure.
Après cela, secouez doucement pour mélanger l’échantillon traité SFE. Et à l’aide d’une pipette propre, transférez la partie liquide dans un tube stérile. Mettez de côté le caillot restant pour un autre cycle de dégradation.
Centrifuger le liquide recueilli à 200 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Ensuite, à l’aide d’une pipette, transférez le surnageant ou la solution de SFE récupérée dans un autre tube propre. Remettre en suspension la pastille cellulaire résultante dans 50 microlitres de solution saline physiologique en mélangeant doucement.
Après cela, effectuez des cycles de dégradation ultérieurs sur les caillots restants à l’aide de la solution SFE récupérée, comme démontré précédemment. Rassemblez le mélange cellulaire de chaque cycle de dégradation pour préparer l’échantillon de cellules sanguines. Ajouter cinq microlitres de l’échantillon de cellule obtenu à la lame de verre revêtue de poly-L-lysine.
Et à l’aide d’une lamelle, étalez les cellules. Laissez le liquide s’évaporer à température ambiante. Pour effectuer la coloration cellulaire, ajoutez doucement 100 microlitres de colorant de droits au frottis cellulaire.
Laissez les cellules se colorer pendant 30 minutes à température ambiante avant de rincer doucement le colorant à l’eau claire. Enfin, examinez les cellules colorées à l’aide d’un microscope optique. Des caillots de sang rouge compacts avec une solution de travail incolore ont été observés au cours des premiers stades de la dégradation.
La dissolution du caillot a été observée après une incubation de 30 minutes et une incubation prolongée allant jusqu’à cinq heures a dissous la plupart des caillots, tandis qu’il n’y avait pas de changement significatif dans le groupe témoin négatif, même après une incubation de 10 heures. Après une coloration correcte, les globules rouges matures, les plaquettes et divers granulocytes ont été clairement identifiables au microscope optique. Les composants cellulaires ont pu être analysés quantitativement à l’aide de l’auto-hématologie avec succès.
