Pour commencer, préparez 10 fois le milieu de culture M199 en dissolvant la poudre M199 à 10 fois la concentration dans 90 millilitres d’eau désionisée, suivie de l’ajout de 10 millilitres de FBS. Filtrez la solution à travers un filtre de 0,22 micron. Le milieu filtré peut être conservé à quatre degrés Celsius jusqu’à deux mois.
Pour préparer le gel matriciel avec des cellules vasculaires, utilisez environ 2 millions de cellules vasculaires. Refroidissez le tube stérile de 1,5 millilitre contenant la pastille de cellule correctement préparée dans un bain de glace. Décongelez complètement le gel matriciel dans un bain de glace sans le mélanger ni le vortexer.
De même, refroidissez le milieu de culture préparé 10 fois M199 avec le réactif de test ou le médicament d’intérêt à quatre degrés Celsius. Ensuite, en maintenant un rapport volumique de 8,8 à 1 à 0,2, combinez le gel matriciel pré-refroidi avec le milieu pré-refroidi 10 fois M199 contenant 10 % FBS, et le réactif de test pré-refroidi pour produire le mélange de gel matriciel. Enfin, remettre en suspension les cellules pré-refroidies dans 400 microlitres du mélange de gel matriciel préparé en mélangeant doucement pour éviter la formation de bulles.
Conservez le tube contenant les cellules dans le gel matriciel sur de la glace jusqu’à ce que les souris soient prêtes pour l’injection de gel matriciel.
