Pour commencer, prélevez les échantillons de matières fécales humaines préparés. Refroidissez la centrifugeuse réfrigérée à grande vitesse à 4 degrés Celsius. Utilisez le PBS pour ajuster le poids des tubes d’échantillon à 0,1 gramme et centrifugez-les à 3 000 g pendant 20 minutes à 4 degrés Celsius.
À l’aide d’une pipette en plastique, transférez le surnageant dans deux tubes de 50 millilitres, en laissant 1 millilitre derrière. Ensuite, centrifugez le surnageant à 12 000 G pendant 30 minutes à 4 degrés Celsius. À l’aide d’une seringue de 20 millilitres, aspirez le surnageant et retirez l’aiguille de la seringue.
Filtrez le liquide à travers des filtres de 0,22 micromètre dans des tubes de 50 millilitres. Ensuite, essuyez le seau avec de l’alcool à 75 % pour éliminer toute contamination restante. Transférez environ 30 millilitres de surnageant fécal filtré dans le tube d’ultracentrifugation.
Remplissez le tube avec environ 8 millilitres de PBS, en laissant un espace de 3 millimètres par rapport à l’ouverture du tube. Placez les deux tubes d’ultracentrifugation dans des godets d’ultracentrifugation opposés et égalisez le poids des deux godets à l’aide de PBS. Chargez tous les godets sur le rotor, qu’ils soient ou non chargés de tubes.
Placez les échantillons dans la centrifugeuse, lancez le vide et faites-les tourner à 160 000 G pendant 70 minutes à 4 degrés Celsius. Dès que la centrifugation est terminée, relâchez le vide de la chambre et ouvrez la porte de l’ultra-centrifugeuse. Ensuite, retirez rapidement le rotor.
Transférez les godets du rotor à la crémaillère et ramassez les tubes à l’aide d’une pince. Jetez le surnageant et conservez les pastilles brunes visibles. Ajoutez 1 millilitre de PBS pré-réfrigéré pour remettre complètement les granulés en suspension.
Remplissez le tube avec environ 37 millilitres de PBS, en laissant un espace de 3 millimètres à partir de l’ouverture. Après avoir effectué un autre cycle d’ultracentrifugation, jetez le surnageant et laissez le tube inversé pendant 5 minutes. Retirez toute solution restante sur la paroi intérieure avec des essuie-glaces.
À l’aide d’une pipette de 1 000 microlitres, ajoutez 1,2 millilitre de PBS pré-réfrigéré pour remettre les granulés en suspension et mélangez-les par pipetage. Transférez 1,2 millilitre de la solution PBS BEV d’un tube d’ultracentrifugation à un microtube propre de 1,5 millilitre.
