Pour commencer, incisez soigneusement la peau de la souris sacrifiée, en commençant par l’ouverture du crâne et en s’étendant vers la zone frontale. À l’aide de ciseaux, soulevez et retirez délicatement le crâne sans endommager les leptoméninges, en recueillant l’ensemble du cerveau. Plongez tout le cerveau dans le tampon de lavage et rincez-le doucement pour éliminer le sang de surface.
Transférez le cerveau dans une boîte de Pétri stérile sans le hacher. Ensuite, au microscope, utilisez une pince à épiler à pointe fine pour extraire les leptoméninges de la surface du cerveau. À l’aide de microciseaux stériles, coupez le tissu leptoméninges en fragments.
Réparez le mélange d’enzymes digestives à l’aide des composants donnés. Ajouter 10 millilitres de mélange aux fragments et incuber à 37 degrés Celsius pendant 15 minutes. Agitez doucement pour détacher les fragments du fond du tube.
Ensuite, ajoutez 10 millilitres de tampon d’arrêt. Centrifuger la suspension à 300 g pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Et à l’aide d’une pipette, retirez délicatement le surnageant.
Ajoutez 10 millilitres de PBS froid et filtrez les grumeaux à travers une passoire de 70 microns dans un tube stérile de 50 millilitres. Plaquez 10 à la cinquième cellule par centimètre carré dans une fiole T25 enrobée de fibronectine avec cinq millilitres de milieu de culture, et incubez à 37 degrés Celsius avec 5% de dioxyde de carbone pendant 24 heures. Après incubation, remplacez le milieu par un milieu frais pour éliminer les cellules non attachées.
