Pour commencer, utilisez une lignée transgénique exprimant la GFP et la nitroréductase, ou NTR, sous un promoteur spécifique des photorécepteurs en bâtonnets. Le NTR convertit le métronidazole, ou MTZ, en un agent cytotoxique pour l’ablation sélective des bâtonnets exprimant le NTR. Pour la surveillance de la GFP, utilisez une cuillère pour attraper doucement un têtard anesthésié et placez-le prudemment sur un tissu humide dans une petite boîte de Pétri.
Observez la fluorescence GFP sous un stéréomicroscope fluorescent et capturez des images photographiques des yeux. Plongez soigneusement la boîte de Pétri avec le têtard dans un grand réservoir avec de l’eau d’élevage jusqu’à ce qu’il soit complètement réveillé. Pour une surveillance individuelle de la dégénérescence rétinienne, placez chaque têtard dans un petit récipient contenant 30 millilitres de 10 millimolaires MTZ, ou des frères et sœurs transgéniques dans la solution témoin.
Pour le traitement par lots, placez les têtards transgéniques dans un récipient plus grand avec un litre de MTZ, ou solution témoin. Élevez les têtards pendant une semaine à 20 degrés Celsius dans l’obscurité pour éviter la dégradation de la ZMT. Après sept jours, observez la GFP sous le stéréomicroscope fluorescent et capturez des images photographiques de l’œil.
Une diminution de l’intensité de la fluorescence, voire une quasi-absence de fluorescence indique la dégradation des bâtonnets. Les yeux des têtards transgéniques traités avec MTZ ont montré une diminution de la fluorescence GFP par rapport aux témoins, ce qui est confirmé sur les coupes rétiniennes par immunomarquage GFP.
