Pour commencer, prenez un capillaire aiguisé, utilisez une pointe de micro-chargeur pour charger 2 à 10 microlitres du complexe ribonucléoprotéique CRISPR Cas9 ou de la solution témoin. Ensuite, placez le capillaire rempli dans le manipulateur de micro-injecteurs. Cassez l’embout capillaire à l’aide d’une pince fine pour ajuster le volume d’éjection à 10 nanolitres.
Positionner les embryons d’un stade cellulaire sur une grille collée dans une boîte de Pétri de 100 millimètres avec une solution de polysaccharose à 3 %. À l’aide du micro-injecteur, et sous un stéréomicroscope, injecter 10 nanolitres de la solution dans la région corticale, plus précisément au niveau du pôle animal sous la membrane cytoplasmique. Après 24 heures, visualisez la fluorescéine, la lysine, la dextrine sous un stéréomicroscope fluorescent et sélectionnez des embryons rho crispant bien injectés.
Le marquage à la caspase 3 des rétines têtardes rho crispant a montré que certains bâtonnets subissent une apoptose. La coloration histologique a révélé une préservation globale des couches nucléaires, mais un raccourcissement sévère des segments externes des photorécepteurs. D’autres analyses de marquage immunologique avec des marqueurs photorécepteurs ont montré la dégénérescence des segments externes des bâtonnets.
