Utilisez une épuisette pour capturer les têtards de leurs réservoirs et les transférer dans une solution de 50 millilitres de benzocaïne à 0,005 %. Laissez-les rester dans la solution jusqu’à ce qu’ils ne répondent plus aux stimuli. À l’aide d’une cuillère, prenez délicatement un têtard et placez-le avec sa face dorsale vers le haut dans une petite boîte de Pétri contenant un mouchoir humide.
Positionnez ensuite l’échantillon sous le stéréomicroscope. Pour commencer, prenez un capillaire aiguisé, utilisez une pointe de micro-chargeur pour charger 10 microlitres de solution de chlorure de cobalt. Ensuite, placez le capillaire rempli dans le manipulateur de micro-injecteurs pour casser l’embout capillaire afin d’ajuster le volume d’éjection à environ 30 nanolitres.
À l’aide du micro-injecteur et d’un stéréomicroscope, insérez le capillaire rempli de chlorure de cobalt sur la lentille dans l’œil. En atteignant l’intérieur de l’œil avec l’embout capillaire, éjectez deux gouttes d’environ 30 nanolitres par œil. Après l’injection de l’œil droit, tournez la boîte de Pétri à un angle de 180 degrés pour injecter l’œil gauche.
Transférez la boîte de Pétri contenant le têtard injecté dans un grand réservoir contenant un litre d’eau d’élevage. Continuez à observer les têtards jusqu’à ce qu’ils se soient complètement réveillés. L’injection de chlorure de cobalt de 10 millimolaires a conduit à la mort cellulaire spécifique des photorécepteurs des cônes, tandis que 25 millimolaires ont conduit à une mort cellulaire rétinienne large.
L’immunomarquage a révélé l’absence de cônes dans les rétines injectées de chlorure de cobalt de 10 millimolaires alors que les bâtonnets étaient en grande partie préservés. Après des injections de chlorure de cobalt de 25 millimolaires, les photorécepteurs et les cellules bipolaires ont été gravement affectés.
