Pour commencer, fixez le tissu pulmonaire porcin dans du paraformaldéhyde à 4% à température ambiante pendant 48 heures. Transférez ensuite le tissu pulmonaire dans un tube conique de 50 millilitres contenant 30 millilitres de PBS avec 0,01% d’azoture de sodium. Gardez un gobelet en plastique, une pince fine et des ciseaux stériles à portée de main.
Faites chauffer l’agarose au micro-ondes jusqu’à ce qu’elle atteigne le point d’ébullition. Ensuite, refroidissez-le à 42 degrés Celsius dans un bain-marie. Conservez-le au bain-marie jusqu’à ce qu’il soit prêt à être utilisé.
Retirez la biopsie pulmonaire de la solution d’azoture de PBS. Utilisez des pinces fines et des ciseaux stériles pour disséquer soigneusement les lobes pulmonaires en blocs plus petits. Ensuite, coupez le milieu d’un gobelet en plastique.
Versez une petite quantité d’agarose au fond de la tasse. Placez le couvercle d’un tube conique de 50 millilitres avec son bord retiré sur la surface de l’acaro. Conservez cette installation à quatre degrés Celsius pendant cinq minutes pour permettre à l’agarose de se solidifier.
Une fois l’agarose solidifiée, sortez le gobelet en plastique du réfrigérateur. Versez maintenant environ un millilitre d’agarose liquide sur le couvercle. Placez ensuite délicatement le bloc de tissu pulmonaire sur le couvercle.
Une fois que l’agarose s’est semi-solidifiée, immergez lentement le tissu pulmonaire dans de l’agarose liquide. Réfrigérer l’installation à quatre degrés Celsius pendant environ 15 minutes jusqu’à ce que l’agarose devienne solide. Utilisez une lame tranchante pour enlever soigneusement tout excès d’agarose entourant le tissu pulmonaire.
