Pour commencer, préparez des solutions pour la cellule, la seringue et pour le nettoyage. Ajouter des échantillons de protéines ou de tampons à trois puits consécutifs sur une plaque de 96 puits. Ajoutez maintenant 100 % de DMSO en conséquence afin que la concentration finale soit de 2 % Exécutez les quatre titrages sur le microcalorimètre.
Chaque titrage doit consister en une injection initiale de 0,4 microlitre de protéine à raison de deux microlitres par seconde, suivie de 19 injections de solution pour seringue de 2 microlitres à raison de 2 microlitres par seconde à des intervalles de 120 secondes pour un total de 20 injections. Exécuter toutes les expériences à 25 degrés Celsius tout en remuant à 600 tr/min. Pour l’analyse des données, ajustez les données à un modèle de site de liaison unique pour obtenir la stœchiométrie n, la constante de dissociation et l’enthalpie de liaison.
La caractérisation du complexe binaire VHL MZ1 et du complexe VHL MZ1 Brd4 a été réalisée. Une coopérativité positive a été observée.
