Commencez les expériences d’interférométrie de biocouche, ou BLI, avec des capteurs codés par le streptocoque, à température ambiante. Assurez-vous que les capteurs sont stationnaires sur une seule rangée. Pipeter 200 microlitres de l’échantillon dans les puits.
Ensuite, plongez le capteur dans une solution contenant du VHL pendant 80 secondes pour charger le capteur à un à trois nanomètres. Plongez maintenant dans le tampon pendant 60 secondes pour établir la première phase de référence. Pour la phase d’immobilisation, plongez les capteurs dans la protéine VHL pendant 80 secondes, puis plongez à nouveau dans le tampon pendant 60 secondes pour établir la deuxième phase de base.
Ensuite, plongez dans une concentration fixe des injections suivantes pendant 300 secondes. Enfin, plongez à nouveau les capteurs dans le tampon pendant 600 secondes pour établir la phase de dissociation. Utilisez le logiciel de l’instrument pour analyser les données et estimer la fréquence de marche, la vitesse d’arrêt et la constante de dissociation d’équilibre.
La caractérisation du complexe binaire VHL/MZ1 et du complexe ternaire VHL/MZ1 BRD4 a été réalisée. On a découvert que MZ1 était médiateur de la formation du complexe ternaire.
