Commencez par placer le PRDM dans un bain-marie réglé à 37 degrés Celsius. Retirez de l’azote liquide un flacon cryogénique contenant des cellules progénitrices photoréceptrices dérivées de l’ESC au jour 32 et conservez-le sur de la glace sèche. Ensuite, décongelez le cryoflacon dans un bain-marie à 37 degrés Celsius pendant trois à cinq minutes.
Remettre les cellules en suspension dans un millilitre de PRDM. Centrifugez-les à 130G pendant quatre minutes Après avoir retiré le surnageant, remettez la pastille en suspension dans un millilitre de PRDM. Pour compter les cellules, prenez 10 microlitres de la suspension cellulaire et mélangez-les avec 0,2 % de bleu de trypan, en suivant les instructions du fabricant.
Pipetez le mélange cellulaire dans la lame de la chambre de comptage cellulaire et déterminez le nombre et la viabilité des cellules à l’aide d’un compteur de cellules automatisé. Si la viabilité cellulaire est supérieure à 70 %, centrifugez la suspension cellulaire restante à 130 G pendant quatre minutes. Retirez le surnageant et remettez en suspension la pastille cellulaire dans le PRDM pour la transplantation.
À l’aide d’un embout de pipette de 10 microlitres, remettre en suspension les amas cellulaires dans le tube de la microfuge jusqu’à ce qu’ils ne soient plus visibles. Chargez la suspension dans une seringue d’injection de calibre 33 et confirmez l’extrusion de la solution cellulaire à travers l’aiguille.
