Pour commencer, placez les coupes de tissu de la muqueuse nasale de rat colorées à l’hématoxyline et à l’éosine sur une platine de microscope. Ajustez la mise au point du microscope jusqu’à ce que l’image soit clairement visible. Capturez l’image du tissu à 40X.
Faites chauffer le tampon de phosphate de citrate jusqu’à ébullition. Ajoutez ensuite les lames dans le récipient après l’avoir retiré du feu. Après avoir chauffé pendant huit minutes jusqu’à ébullition, éteignez le feu pendant huit minutes, puis passez à feu moyen-doux pendant sept minutes.
Après avoir laissé le récipient refroidir naturellement, transférez les tranches dans du PBS. Utilisez un shaker décolorant pour secouer les tranches pendant cinq minutes. Ensuite, tracez un cercle autour du tissu séché avec un stylo immunohistochimique.
Ajouter une solution de peroxyde d’hydrogène à 3 % aux tranches avant l’incubation. Transférez ensuite les tranches sur PBS pour les laver comme précédemment. Pour bloquer, appliquez 5% de sérum de chèvre dans le cercle marqué.
Après l’incubation, retirez soigneusement la solution bloquante et ajoutez un à deux millilitres de FOXP3 aux tranches de tissu. Placez ensuite les tranches dans une chambre humide pour une incubation nocturne. Après avoir lavé les tranches dans du PBS, tamponnez-les doucement avec du papier filtre.
Ajoutez ensuite un à deux millilitres de la solution d’anticorps secondaire aux tranches. Ensuite, incubez les tranches dans 100 microlitres de solution de travail d’amplification du signal tyramide pendant 10 minutes à température ambiante dans l’obscurité. Après l’incubation, lavez les tranches avec du PBS trois fois pendant cinq minutes chacune.
Appliquez maintenant un à deux millilitres de solution de coloration DAPI sur les tranches avant l’incubation. Éteignez l’autofluorescence en incubant les tranches dans la trempe pendant cinq minutes avant un lavage PBS de 10 minutes. Scellez-les ensuite avec la désaltérante anti-fluorescence.
Capturez les images microscopiques des sections colorées sous un grossissement de 20X et 40X. La coloration à l’hématoxyline et à l’éosine des rats témoins a montré que les cellules épithéliales et les cils étaient bien disposés. La muqueuse nasale de la cloison nasale a été endommagée et détachée dans le groupe de la maladie avec une infiltration notable de neutrophiles.
La coloration multi-immunofluorescente a révélé que les expressions de ROR Gamma T et de TCAM1 étaient augmentées dans le groupe maladie. Cependant, FOXP3 était sous-exprimé.
