Pour commencer, accédez à l’interface du site Web de la base de données TIMER2.0. Sélectionnez l’onglet Exploration du cancer. Entrez l’ID du gène dans la zone de recherche et cliquez sur Soumettre pour produire les images d’expression différentielle des TMEM200A dans différents types de tumeurs.
Pour la transfection, étiquetez trois tubes de micro-centrifugation comme siRNA-1, 2 et 3. Ajoutez ensuite le réactif de transfection suivi du milieu basal dans chaque tube. ajoutez quatre microgrammes de siRNA dans les tubes respectifs et mélangez soigneusement.
Répartissez maintenant le mélange dans les trois puits de la plaque à six puits contenant les cellules d’adénocarcinome. Secouez doucement la plaque pour assurer une répartition uniforme du mélange. Étiquetez les trois puits où le mélange a été ajouté comme siRNA 1, siRNA deux et siRNA trois.
Après avoir incubé les cellules pendant quatre à six heures, remplacez la moitié du milieu dans les puits étiquetés par un milieu complet frais. Incubez les cellules pendant 24 à 48 heures avant de les utiliser pour la RTPCR quantitative et le Western blot.
