Pour commencer, transfectez les cellules d’adénocarcinome de l’estomac avec TMEM200A siRNA et incubez pendant deux jours. Ensuite, jetez le milieu de culture cellulaire des puits et lavez doucement les cellules deux fois avec un millilitre de PBS. À l’aide d’un kit d’isolement de l’ARN, isolez l’ARN total des cellules.
Estimez la concentration d’ARN et synthétisez l’ADNc avec un microgramme d’ARN à l’aide d’une trousse de synthèse d’ADNc, en suivant les instructions du fabricant. Maintenant, mettez en place un RTPCR quantitatif sur des dilutions décuplées de l’ADNc dans un mélange réactionnel de 10 microlitres. Ajoutez des amorces et un mélange maître PCR quantitatif à l’aide du système de test PCR en temps réel.
Utilisez les conditions quantitatives de réaction PCR présentées ici et déterminez l’expression relative de chaque gène à l’aide de la technique de TDM double delta. La lignée cellulaire HGC-27 a considérablement surexprimé la protéine TMEM200A et le transcrit d’ARNm par rapport à la lignée cellulaire GES-1. L’expression différentielle de l’ARNm de TMEM200A dans les cellules cancéreuses gastriques humaines, SGC-7901, est plus élevée que dans les cellules GES-1.
