Pour commencer, prélevez les échantillons d’urine des personnes en bonne santé. Centrifuger 12 millilitres d’échantillon dans un tube conique de 15 millilitres pour éliminer les débris cellulaires dans les grands corps apoptotiques. Ensuite, transférez 10 millilitres de surnageant dans un tube frais de 15 millilitres.
Ajouter un millilitre de tampon de chargement et 200 microlitres de boue de billes de piège EV à l’échantillon. Incuber l’échantillon à température ambiante pendant 30 minutes avec rotation d’un bout à l’autre. Pour granuler l’échantillon, placez le tube conique de 15 millilitres sur une grille de séparateur magnétique.
Retirez délicatement le surnageant et remettez les billes en suspension dans un millilitre de tampon de lavage. Ensuite, transférez la suspension dans un micro-tube à centrifuger de 1,5 millilitre et pipetez doucement pour remettre en suspension la vésicule extracellulaire ou les billes liées à l’EV. Placez le tube micro-centrifuge sur une grille de séparateur magnétique pour tubes de 1,5 millilitre.
À l’aide d’une pipette P200, aspirer délicatement le surnageant. Maintenant, lavez les billes avec un millilitre de tampon de lavage, suivi de deux lavages avec un millilitre de PBS à température ambiante. Incubez les billes avec 100 microlitres de triéthanolamine de 100 millimolaires fraîchement préparée pendant cinq minutes.
À l’aide d’un support de séparateur magnétique à micro-tubes à centrifuger de 1,5 millilitre, recueillir la solution éludée contenant des VE. Après avoir combiné les solutions éludées, séchez l’éluit à l’aide d’un concentrateur centrifuge sous vide à quatre degrés Celsius.
