Pour commencer, notez le poids de chaque souris, puis positionnez la souris euthanasiée en décubitus dorsal et fixez ses membres avec du ruban adhésif. Utilisez de l’alcool isopropylique à 70 % pour stériliser la zone chirurgicale. Ensuite, créez une incision médiane sur la peau en partant du milieu de l’abdomen jusqu’à la région cervicale antérieure.
Pour accéder à la trachée, rétractez soigneusement les coussinets adipeux, déplacez latéralement les muscles de la sangle et séparez la trachée du tissu conjonctif environnant. À l’aide d’une pince, créez un espace entre la trachée et l’œsophage. Soulevez ensuite le xiphoïde et coupez le diaphragme.
Insérez un hémostatique pour soulever le sternum afin d’obtenir un chemin dégagé du sternum à la région du cou. Serrez la cage thoracique des deux côtés et coupez le sternum qui traverse les muscles du cou. Retirez maintenant le thymus et toute graisse ou muscle obstruant la trachée pour exposer la bifurcation trachéale.
Coupez les bronches principales et séparez soigneusement les voies respiratoires de l’œsophage. Ensuite, coupez le larynx et retirez-le. Vaporisez la trachée disséquée avec une solution saline stérile ou une solution de conservation.
Utilisez une gaze stérile imbibée d’une solution saline stérile ou d’une solution de conservation et placez-la sur de la glace pour maintenir sa viabilité. Après avoir légèrement anesthésié la souris et une chambre d’induction, injecter par voie intrapéritonéale un cocktail composé de xylazine et de kétamine. Remettez la souris dans la chambre d’induction avec 2 à 3 % d’isoflurane maintenus.
Ensuite, rasez la fourrure au site chirurgical. Confirmer l’absence de réponse réflexe à un pincement de l’orteil avant l’intubation orotrachéale. À l’aide d’un cathéter intraveineux de calibre 20, intubez la souris par voie orotrachéale et connectez-la à un ventilateur contenant 50 % d’oxygène et 2 % d’isoflurane.
Maintenant, activez un coussin chauffant et positionnez la souris en position latérale droite sur le coussinet avec la tête éloignée du chirurgien et la queue vers le chirurgien. Fixez ensuite les membres avec du ruban adhésif. Appliquez une pommade vétérinaire sur les yeux pour prévenir la sécheresse sous anesthésie.
Frottez d’abord la zone chirurgicale avec 7,5 povidone iodée, puis 70 % d’alcool isopropylique et enfin avec 10 % de povidone iodée. Pendant ce temps, chargez la trachée du donneur dans un cathéter intraveineux de calibre 16. Après avoir pratiqué une incision dans la peau du receveur, cautériser le muscle et le tissu conjonctif.
À l’aide de deux écarteurs, ouvrez le cinquième ou le sixième espace intercostal et maintenez la cage thoracique ouverte. Ensuite, utilisez des cotons-tiges et des ciseaux pour disséquer le ligament pulmonaire inférieur. Simulez la création de la voie de la trachée du donneur.
Pour fixer le tube de sortie du ventilateur, obstruez-le partiellement avec un robinet d’arrêt à trois voies pour faciliter le gonflage du poumon gauche. Ponctionnez le poumon gauche avec une aiguille de calibre 20 pour créer un chemin. Insérez ensuite le cathéter intraveineux de calibre 16 dans le poumon gauche et extrudez-y la trachée du donneur.
Après l’insertion de l’allogreffe trachéale, relâchez le robinet d’arrêt à trois voies pour permettre un écoulement expiratoire non obstrué à travers le tube de sortie. Pour fermer le site d’injection pleurale, positionnez le clip avec précision sur le site de ponction avec son bord aligné sur le contour du bord du poumon. Remplissez ensuite la cavité thoracique avec une solution saline et absorbez la solution saline avec de la gaze.
Regonflez le poumon gauche et fermez les côtes à l’aide d’une suture courante. Fermez le muscle et la peau avec des sutures interrompues. Maintenant, éteignez l’isoflurane et administrez l’analgésique méloxicam par voie sous-cutanée à la fin de la chirurgie.
Observez la souris réceptrice jusqu’à ce qu’elle soit réveillée. Retirez ensuite la sonde trachéale et placez la souris receveuse dans une cage. Une allogreffe trachéale a montré une obstruction complète du tissu fibroblastique et les cellules épithéliales ont été visiblement détruites.
À l’inverse, une isogreffe trachéale est restée patente, et les cellules épithéliales ont été préservées. Des agrégats lymphoïdes ont été observés dans le poumon avec l’allogreffe trachéale transplantée.
