Pour commencer, incubez les embryons de poisson-zèbre injectés à 28 degrés Celsius. Environ 1,5 HPF au stade de quatre à 16 cellules, éliminent les embryons non fécondés et en mauvaise santé. Pour le test de phénotypage, enveloppez la plaque de contrôle non exposée avec des embryons non injectés et injectés dans du papier d’aluminium.
Placez l’assiette recouverte de papier d’aluminium sur l’étagère inférieure et la plaque exposée sur l’étagère supérieure de la boîte à lumière à 28 degrés Celsius. Après avoir vérifié que le couvercle de la vaisselle est en place, activez la lumière bleue et fermez la porte du caisson lumineux pour éviter une exposition involontaire à la lumière de la pièce. Pour le test d’immunofluorescence autour de 1,5 HPF, enveloppez individuellement les boîtes exposées et non exposées dans du papier d’aluminium tout en gardant la boîte de substitution non emballée.
Mettez toute la vaisselle dans la boîte à lumière à 28 degrés Celsius sans activer la LED. Fermez la porte du caisson lumineux pour éviter toute exposition accidentelle à la lumière ambiante. À environ cinq HPF, utilisez une lunette de dissection pour évaluer le stade de développement des embryons par procuration.
Retirez également les plats emballés pour assurer une exposition uniforme à la température dans tous les plats. Une fois que les embryons par procuration atteignent 40 % d’épibole, découvrez la boîte exposée et placez-la sur l’étagère supérieure de la boîte à lumière. Gardez le plat non exposé couvert sur l’étagère inférieure.
Activez immédiatement la lumière bleue, fermez la porte et réglez une minuterie sur 20 minutes. Pour vous préparer à la fixation, éliminez autant que possible la lumière ambiante. Juste avant la fixation, prenez des tubes contenant 4% de formaldéhyde à quatre degrés Celsius et placez-les à côté de la boîte à lumière.
Après 20 minutes, ouvrez la porte de la boîte à lumière et retirez la parabole qui n’a pas été exposée à la lumière. À l’aide d’une pointe de pipette en verre flammé, retirez les embryons sensibles à la lumière de la boîte. Ensuite, pour immerger les embryons dans du formaldéhyde à 4%, plongez l’embout de la pipette en verre flammé dans le formaldéhyde et laissez les embryons s’enfoncer dans le liquide.
Conservez les embryons fixés à quatre degrés Celsius pendant la nuit.
