Dissociation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice

Pour commencer, disséquez le cerveau et les tissus de la moelle épinière et stockez la suspension cellulaire sur de la glace. Préparez ensuite un volume approprié de mélange enzymatique-1 et 2. Transférez 1 950 microlitres d’enzyme mix-1 dans le tube C et ajoutez les morceaux de tissu de la suspension cellulaire du SNC.

Ajoutez ensuite 30 microlitres d’enzyme mix-2 dans le tube C. Fermez hermétiquement les tubes en C et fixez-les à l’envers sur le manchon du dissociateur de cellule avec des éléments chauffants. Exécutez le programme approprié et observez pendant au moins cinq minutes pour vous assurer que tous les tubes tournent à la même vitesse.

Pendant ce temps, placez une passoire de 70 microns sur un tube de 50 millilitres et pré-humidifiez la passoire avec deux millilitres de DPBS. Après la fin du programme, détachez les tubes C du dissociateur et centrifugez les échantillons à 300 g pendant une minute à quatre degrés Celsius. Remettre l’échantillon en suspension et l’appliquer sur la passoire pré-humidifiée.

Ajoutez 10 millilitres de DPBS froid dans le tube C vide. Mélangez et ajoutez la suspension sur la passoire correspondante. Après avoir jeté les crépines, centrifugez à nouveau la suspension cellulaire pendant 10 minutes, puis aspirez soigneusement le surnageant pour obtenir une pastille cellulaire.