Isolation of CNS Cell Types Using Magnetic Beads in Naive and EAE Mice

Pour commencer, divisez la suspension de cellules du SNC purifiée et non diluée de souris en deux fractions pour isoler davantage la microglie et les oligodendrocytes. Ajoutez ensuite à la suspension cellulaire respective une microbille marquée magnétiquement spécifique de l’antigène de surface pour différents types de cellules du SNC. Placez la colonne dans le champ magnétique, égalisez la colonne, puis ajoutez la suspension cellulaire résultante sur la colonne.

Les cellules marquées magnétiquement seront conservées dans la colonne, et les cellules non étiquetées passeront à travers. Après avoir retiré la colonne du champ magnétique, rincez les cellules marquées magnétiquement de la colonne dans un tube en tant que fraction cellulaire sélectionnée positivement. Divisez le flux négatif des oligodendrocytes en deux fractions pour les isolements ultérieurs des neurones et des astrocytes.

L’analyse par cytométrie en flux à l’aide de marqueurs spécifiques au type de cellule combinée à la discrimination des cellules vivantes ou mortes a permis d’obtenir des microglies, des oligodendrocytes, des astrocytes et des neurones. La caractérisation phénotypique des différentes populations cellulaires a montré que des suspensions unicellulaires d’une pureté et d’une viabilité d’environ 90 % ont été obtenues pour tous les principaux types de cellules résidentes du SNC.