Commencez par prélever des spermatozoïdes de la cota epididyme, isolés d’une souris modèle transgénique exprimant AcroSensE. Effectuer le prélèvement de sperme dans une boîte de culture tissulaire de 3,5 centimètres contenant 0,5 millilitre de milieu MW en permettant une procédure de nage de 15 minutes à 37 degrés Celsius. Ensuite, à l’aide d’une pince fine, retirez soigneusement tout tissu épididymaire de la boîte de collecte.
Transférez le milieu contenant les spermatozoïdes dans un tube conique de 15 millilitres et, à l’aide d’un rotor à godets oscillants, centrifugez la suspension à 100 G pendant une minute à température ambiante. À l’aide d’une pipette en plastique, prélever le surnageant MW contenant le spermatozoïde tout en jetant toute pastille de débris tissulaires grossiers et transférez-le dans un tube à fond rond. Ajustez le volume surnageant à un millilitre en ajoutant 500 microlitres de milieu MW préchauffé à 37 degrés Celsius.
Centrifugez ce mélange à 400 G pendant huit minutes à température ambiante dans un tube à fond rond. Ensuite, retirez soigneusement le surnageant tout en laissant derrière lui les spermatozoïdes légèrement granulés. À l’aide d’un tuyau de transfert de grand diamètre, remettez le sperme en suspension en tapotant doucement le tube manuellement, ce que l’on appelle le mouvement des doigts.
Une fois que les spermatozoïdes sont uniformément remis en suspension, transférez-les dans un nouveau tube à fond rond.
