Cryopreservation of Primordial Germ Cells Collected from Drosophila Donor Embryos

Procéder à la cryo-conservation des cellules germinales primordiales ou PGC. Après avoir collecté et déposé les PGC des embryons de donneurs à la surface d’un embryon. Lavez l’aiguille de transplantation avec un agent cryoprotecteur ou CPA et chargez le CPA frais dans l’aiguille.

Ajouter le CPA chargé aux PGC déposés sur l’embryon tout en s’assurant que le volume de CPA est équivalent à celui des PGC. Retirez l’excès de CPA du groupe de PGC une à deux secondes après l’ajout de CPA. Ensuite, videz l’aiguille et remplissez-la d’huile de silicone pendant cinq secondes ou plus.

Chargez tous les PGC collectés dans l’aiguille, puis chargez à nouveau l’huile de silicone pendant cinq secondes ou plus. Assurez-vous que les PGC sont pris en sandwich entre deux couches d’huile de silicone. Détachez l’aiguille du micromanipulateur à l’aide de papier de soie doux, épongez l’huile de la surface de l’aiguille sans toucher la pointe de l’aiguille avec le tissu.

Fixez l’aiguille à un porte-aiguille et, à l’aide de ruban adhésif en vinyle, verrouillez-la en position à la base. Congelez le support avec l’aiguille pointant vers le bas en l’immergeant dans de l’azote liquide. Ne relâchez pas le support tant que le liquide n’a pas cessé de pétiller hors de la grille.

Stockez le support dans un réservoir de stockage d’azote liquide dans la zone de la phase liquide.