Thawing and Transplantation of Cryopreserved Primordial Germ Cells for Drosophila Strain Revival

Pour commencer, alignez les embryons hôtes de drosophile mimétiques de l’œuf de stade cinq sur une lame de verre de transplantation. Tout en orientant leur postérieur vers la droite et ventral vers le haut, alignez environ 30 embryons en deux rangées en 20 minutes. Décongelez les PGC cryoconservés dans l’aiguille en immergeant le support avec l’aiguille pointant vers le bas dans la solution EBR à température ambiante.

Gardez-le immergé pendant 10 secondes. Placez la lame de verre de transplantation sur la platine du microscope. Fixez l’aiguille congelée au support capillaire et amenez le premier embryon dans la rangée de gauche et la pointe de l’aiguille dans le même plan focal.

À l’aide d’une lentille d’objectif 20x, positionnez doucement la pointe de l’aiguille à la surface de l’extrémité postérieure de l’embryon. Poussez doucement l’extérieur de chaque embryon et confirmez qu’ils reprennent lentement leur forme d’origine. Pénétrer un embryon à partir du pôle postérieur à l’aide de l’aiguille.

Déposez doucement environ 10 à 20 PGC à l’intérieur du pôle postérieur, en particulier entre la membrane vitelline et la couche de cellules somatiques, et rétractez l’aiguille de l’embryon avant de répéter la même chose pour les embryons suivants. Enfin, pour raviver la souche, croisez des femelles et des mâles nouvellement émergés.