Pour commencer, prenez un film plastique polyéthylène de 16 centimètres de long, 12 centimètres de large et 20 micromètres d’épaisseur. Utilisez un outil de meulage du verre pour presser 30 protubérances semi-circulaires dans une disposition PCR standard à 96 puits. Exposez les deux côtés du film plastique de polyéthylène pressé à la lumière UV pendant une heure pour le désinfecter.
Ajoutez une petite quantité d’alcool polyvinylique à 10 % sur la surface semi-circulaire. Ensuite, placez environ 3 000 guêpes trichogrammes femelles anesthésiées dendrolimi dans une boîte de collecte. Placez le côté convexe de la carte d’œuf en film vers la boîte de collecte et fixez les bords avec un élastique.
Ajoutez maintenant quatre microlitres de solution d’acide aminé à chaque protubérance. Ensuite, couvrez-le d’un autre morceau de film plastique en polyéthylène. Utilisez un élastique pour recouvrir hermétiquement la boîte de collecte de deux feuilles de plastique.
Laissez les guêpes parasiter librement pendant quatre à huit heures. Fournir 10% d’eau de saccharose à travers le coton humide pendant le parasitage. Ensuite, obtenez la solution d’acides aminés parasité à partir de la saillie interne de la carte d’œuf artificiel et transférez-la dans le bouchon de tubes de 1,45 millilitre.
Recouvrez le bouchon du tube d’un filet en nylon de 10 micromètres, d’un diamètre de 25 millimètres. Fixez ensuite légèrement le filet en nylon dans le tube. Centrifuger le tube supérieur droit à 1, 360 g pendant 10 secondes.
Recueillir la solution filtrée contenant le venin. Conservez le venin à moins 80 degrés Celsius pour d’autres analyses. L’analyse BCA des échantillons de venin a montré que la concentration de protéine de venin variait de 0,35 à 0,46 microgramme par microlitre.
Le témoin négatif de la solution d’acides aminés n’avait qu’une concentration en protéines de 0,03 à 0,05 microgramme par microlitre. L’analyse SDS-PAGE du venin a montré une gamme de protéines allant de moins de 10 kilodaltons à plus de 130 kilodaltons.
