Pour extraire les données du test Bradford à partir des images de la microplaque enregistrées à l’aide de l’appareil photo du smartphone, téléchargez l’image logicielle J et le plugin ReadPlate disponible sous forme de fichier texte. Après avoir ouvert l’image J, cliquez sur Plugins puis sur Installer, et sélectionnez le fichier texte du plugin ReadPlate téléchargé. Définissez les paramètres de mesure en cliquant sur Analyser, puis sur Définir les mesures et en cochant les options :Surface, Écart type, Valeur de gris minimale et maximale, Valeur de gris moyenne, Valeur de gris modale.
En bas de la fenêtre, définissez Redirection sur Aucun et Décimale sur zéro à 9 sur 3. Allez dans Fichier. Cliquez sur Ouvrir et sélectionnez la photo de la microplaque prise à l’aide du smartphone.
Allez dans Plugins puis dans ReadPlate. Lisez les instructions, puis cliquez sur OK. Sélectionnez le nombre de puits comme 96. À l’aide de l’outil de sélection rectangulaire chargé automatiquement par le plugin, créez un rectangle commençant au centre du puits A1 et se terminant au centre du puits H12, puis cliquez sur OK. Sélectionnez le canal bleu et cliquez sur OK. Confirmez ensuite les paramètres par défaut en cliquant sur OK. Vérifiez si le logiciel a délimité une zone à l’intérieur de chaque puits et si les zones sélectionnées ne couvrent pas les zones présentant des ombres ou des reflets anormaux.
Une fois cochée, cliquez sur OK. Enregistrez les résultats avant de répéter la même chose pour le canal vert. Calculez le rapport bleu/vert à l’aide du mode de chaque couleur. Les données de couleur RVB obtenues automatiquement à partir de l’image d’une microplaque ont montré l’augmentation typique des valeurs bleues et une diminution des valeurs rouges et vertes pour la norme BSA.
De plus, les données de couleur extraites de l’image reflétaient avec précision les lectures d’absorbance enregistrées à 450 et 590 nanomètres. La courbe standard obtenue avec les données de couleur extraites représentant le signal en fonction de la concentration de BSA s’est avérée linéaire comme prévu. Une relation linéaire entre la dilution de l’échantillon et le signal a été obtenue pour les deux lectures d’absorbance ainsi que pour les données de couleur extraites dans deux échantillons de protéines différents.
Pour les deux échantillons de protéines, certaines dilutions n’étaient pas dans la plage linéaire de la courbe standard. Cependant, après avoir ignoré ces points, les niveaux de protéines calculés à l’aide des données RVB pour les deux échantillons correspondaient à ceux calculés à l’aide des lectures d’absorbance.
