Commencez par aspirer 20 microlitres de suspension de cellules de mélanome B16F10-GP à l’aide d’une seringue à insuline 100-U. Retirez les bulles de la seringue. Ensuite, chez une souris qui a subi une chirurgie de résection tumorale, injectez la suspension cellulaire dans un ganglion lymphatique inguinal.
Insérez l’aiguille à partir de l’extrémité distale du ganglion lymphatique et déplacez-la lentement vers le centre du ganglion lymphatique. Observez un gonflement important du ganglion lymphatique montrant que le liquide est injecté avec précision. Injectez un volume égal de PBS dans le ganglion lymphatique inguinal de l’autre côté.
Suturez l’incision à l’aide d’une suture 3-0. Désinfectez la peau entourant la plaie avec de la povidone iodée, puis placez la souris dans une cage propre et maintenez la chaleur à l’aide de la lumière infrarouge. Gardez la souris en position de décubitus latéral et surveillez en permanence jusqu’à ce que la conscience soit rétablie.
Après implantation avec des cellules B16F10-GP, des métastases ganglionnaires ont été observées par coloration à l’hématoxyline et à l’éosine. Au stade précoce, le ganglion lymphatique métastatique a montré une occupation partielle par des cellules tumorales, certaines zones contenant encore des lymphocytes non affectés. À un stade avancé, le ganglion lymphatique métastatique était rempli de cellules tumorales accompagnées d’angiogenèse tumorale.
De plus, la fréquence des lymphocytes T CD8 positifs spécifiques à l’antigène dans le sang périphérique était de 2,81 % au stade précoce, qui est tombée à 1,48 % au stade avancé. Il est intéressant de noter que si le pourcentage de lymphocytes T CD8 positifs est resté stable dans les ganglions lymphatiques non métastatiques, il a été stimulé transitoirement dans le ganglion lymphatique métastatique au stade précoce, mais a fortement diminué au stade avancé.
