Pour commencer, ajoutez 150 millilitres de billes de verre propres de cinq millimètres dans le bocal propre et fermez le couvercle. Couvrez le bocal fermé avec suffisamment de papier d’aluminium pour dissimuler la jonction entre le couvercle et le bocal et autoclavez à 121 degrés Celsius pendant 20 minutes. Lorsque les plants sont prêts à être transférés dans le bocal sur la paillasse stérile, retirez le papier d’aluminium et le couvercle du bocal.
Ajoutez 35 millilitres de milieu Murashige et Skoog à demi-concentration de pH 5,7 à 5,9 dans le pot et remuez les perles pour les enrober uniformément avec le milieu. Introduisez trois à cinq semis dans le bocal, en veillant à ce que les systèmes racinaires soient placés entre les billes de verre. Ajustez les perles à l’aide d’une pince ou d’une cuillère stérile pour couvrir les racines et soulever les feuilles hors du milieu.
Fixez deux bandes de ruban adhésif microporeux de 1,25 centimètre sur le dessus du bocal et placez délicatement le couvercle sur le dessus. Scellez l’espace entre le couvercle et le bocal avec du ruban microporeux de 2,5 centimètres pour maintenir la stérilité tout en permettant l’échange d’air, et placez le bocal dans une chambre de croissance. Lorsque les plantes atteignent l’âge souhaité, retirez le ruban microporeux et le couvercle du bocal.
Aliquote 20 microlitres de milieu de culture sur la plaque de gélose LB pour les tests de stérilité. À l’aide d’une pipette jaugée de 25 millilitres, retirez le plus de milieu de culture possible sans endommager les racines. Ajoutez 50 millilitres de milieu de collecte le long de la paroi du pot pour éviter de mouiller les feuilles.
Fermez le bocal avec un couvercle et incubez dans des conditions stériles pendant deux heures. Après l’incubation, prélever la quantité désirée de milieu de collecte dans des tubes. Mesurez le poids de la racine et de la pousse de la plante dans un bocal pour normaliser les exsudats racinaires en fonction du poids de la plante.
Les plantes d’Arabidopsis thaliana semblaient en bonne santé dans deux laboratoires différents. Le système de bocaux en verre s’est avéré adaptable à différentes espèces végétales et à différents stades de développement. Le blé a obtenu les poids de chute les plus élevés, suivi du sorgho et de la tomate.
Le sorgho avait le poids racinaire le plus élevé, suivi du blé et de Medicago truncatula. L’inoculation d’Arabidopsis thaliana avec des bactéries commensales n’a pas modifié le phénotype de la plante, et les bactéries inoculées ont persisté dans le système pendant au moins 12 jours avec une légère augmentation des unités formant des colonies.
