Pour commencer, retirez la matrice de la membrane basale décongelée de la glace. Ajoutez le volume calculé de la matrice de la membrane basale aux cellules individuelles dérivées de la biopsie gastrique et mélangez doucement en pipetant de haut en bas pendant environ 10 secondes. Ensuite, à l’aide d’une pipette, transférez rapidement 50 microlitres d’aliquotes de la matrice et du mélange cellulaire au centre des puits individuels dans une plaque de culture tissulaire à 24 puits.
Couvrez immédiatement l’assiette et, d’un seul mouvement fluide, retournez l’assiette. Placez la plaque inversée dans un incubateur de culture tissulaire à 37 degrés Celsius pendant 35 minutes pour permettre à la matrice de la membrane basale de polymériser. Ajoutez ensuite 500 microlitres de milieu organoïde gastrique préchauffé dans chaque puits tout en vous assurant que le haut de chaque dôme est complètement immergé dans le milieu.
Les organoïdes sont généralement identifiables dans les 10 jours suivant l’ensemencement des cellules individuelles. Au jour 20, ils sont grands et doivent généralement être traversés. Le nombre d’organoïdes corporels et antraux culmine au jour 10 après l’ensemencement avant de diminuer, mais pas de manière significative.
Les organoïdes générés à partir de tissus de biopsie du manteau ont montré un taux de croissance plus élevé que les organoïdes générés à partir de tissus de biopsie corporelle. Chez différents patients, une diversité de morphologie organoïde a généralement été observée dans un seul dôme. Cependant, en moyenne, la spasticité organoïde a montré peu de variation.
