Une fois que les organoïdes gastriques dérivés du patient sont prêts à être emballés, commencez à passer systématiquement les organoïdes. Tout d’abord, retirez le milieu de chaque puits, contenant les organoïdes, incorporés dans la matrice de la membrane basale, dans la plaque à 24 puits. Distribuez ensuite un millilitre de média DMEM F12 avancé glacé directement sur un dôme matriciel à membrane basale.
Continuez à aspirer et à distribuer le milieu jusqu’à ce que tous les fragments du dôme se détachent de la plaque. Ensuite, transportez à la fois le média et la matrice de membrane basale fragmentée du puits au puits suivant et répétez le processus pour tous les puits destinés à être emballés. Après avoir démonté le dernier dôme matriciel de la membrane basale, distribuez le média et le mélange dans un tube de 1,5 millilitre.
Fixez un embout de 1000 microlitres à une pipette P1000, puis insérez cet embout dans un embout de 200 microlitres. À l’aide de cette configuration de pipette, pipetez vigoureusement le mélange de matrice organoïde de haut en bas, environ 25 fois pour fragmenter les organoïdes en petits morceaux. Centrifuger le mélange organoïde fragmenté, à l’aide d’une centrifugeuse de table à quatre degrés Celsius pendant 30 secondes à 2000 G.À l’aide d’une pipette, aspirer le milieu et le surnageant de la matrice de la membrane basale.
Ajoutez le volume calculé de matrice de membrane basale fraîche aux organoïdes granulés dans le tube. Pipetez doucement le contenu du tube de haut en bas pour mélanger. Rapidement aliquote, 50 microlitres du mélange de matrice organoïde dans des puits individuels d’une plaque de 24 puits.
Couvrez immédiatement l’assiette et d’un seul mouvement lisse, retournez l’assiette. Placez la plaque inversée dans un incubateur de culture tissulaire à 37 degrés Celsius pendant 35 minutes pour permettre à la matrice de la membrane basale de polymériser. Enfin, ajoutez 500 microlitres de milieux organoïdes gastriques préchauffés dans chaque puits.
Au jour 20 après l’initiation, les organoïdes étaient prêts à être évacués, ce qui indiquait une grande taille d’organoïde ou un intérieur sombre. Les organoïdes laissés pour aller au-delà de ces points, ont commencé à se décomposer en monocouches 2D. Après l’emballage et le réensemencement gastrique, les dômes contenaient de nombreux fragments d’organoïdes qui se réorganisaient très rapidement en beaucoup plus d’organoïdes.
