Commencez par ajouter 2,125 millilitres de gradient de densité isotonique à un tube en polypropylène de 15 millilitres contenant de l’homogénat de cerveau murin. Remplissez chaque tube avec le tampon de télécopie jusqu’à un volume final de 8,5 millilitres. Retournez doucement les tubes 20 fois pour bien mélanger.
À l’aide d’une pipette de transfert graduée étroite, sous-tendre délicatement quatre millilitres de rose à gradient de densité de 37 % en établissant deux couches propres. Changez de pipettes de transfert et sous-posez deux millilitres de la couche bleue à gradient de densité de 70 % sous la couche de 37 %. Transférez les tubes dans une centrifugeuse, refroidissez-les à quatre degrés Celsius et faites-les tourner à 500 G pendant 20 minutes avec la rampe de freinage réglée sur le réglage le plus bas.
Après la centrifugation, jetez la myéline du haut du tube de 15 millilitres à l’aide d’une pipette de transfert propre. Prélever soigneusement le fragment supérieur du gradient de densité dans un tube en polypropylène propre de 15 millilitres à l’aide d’une autre pipette de transfert. Ensuite, rassemblez toutes les cellules de l’échantillon en faisant lentement le tour de la pipette le long des côtés du tube tout en recueillant le fragment enrichi en système immunitaire.
Transférez le fragment enrichi en système immunitaire dans un nouveau tube en polypropylène de 15 millilitres. Lavez l’échantillon en ajoutant 10 millilitres de fax dans le tube. Retournez doucement le tube 20 fois pour bien mélanger.
Faites tourner les tubes dans une centrifugeuse refroidie avec la rampe de freinage réglée sur le réglage le plus bas pour granuler les cellules immunitaires isolées.
