Analysez le panel d’anticorps, confirmez que le cytomètre a un minimum de quatre lasers, y compris le rouge, le jaune, le bleu et le violet. Établissez la matrice de compensation à l’aide de cordons de compensation ou de contrôles de cellules de coloration uniques. Pour calibrer et normaliser, exécutez des billes fluorescentes arc-en-ciel au début de chaque expérience en ajustant la tension du tube photomultiplicateur jusqu’à ce que les pics de perles s’alignent sur les valeurs cibles des expériences précédentes.
Réglez la tension et le gain du tube photomultiplicateur pour l’expérience. Ensuite, utilisez des billes de compensation capturées par les anticorps pour établir une matrice de compensation. Ensuite, tracez la zone de dispersion latérale sur log par rapport à la hauteur de dispersion vers l’avant sur linéaire dans un graphique à points, éliminez les débris et sélectionnez la taille de cellule à l’aide de la porte S1, choisissez des cellules singulet dans un graphique à points une largeur de dispersion vers l’avant par rapport à la hauteur de dispersion vers l’avant avec la porte S2.
Pour établir les portes du quatrième étage, utilisez le FMO approprié pour chaque canal du quatrième étage. À l’aide d’histogrammes à paramètre unique, déterminez le signal positif dans chaque canal et établissez les portes en conséquence. Enregistrez soigneusement les échantillons en utilisant la stratégie de contrôle établie.
Identifiez la microglie à l’aide du signal P2 RY 12 plus et déterminez l’expression de la protéine dans le canal respectif pour la microglie uniquement. Établissez des portes d’analyse sur l’interface utilisateur du logiciel d’analyse du cytomètre en reproduisant la même stratégie de déclenchement que celle utilisée lors de l’enregistrement. Utilisez la fonction d’ajout de statistiques pour sélectionner la médiane de la population d’intérêt sur la hauteur du canal compensé.
Exportez les valeurs de l’IMF pour les canaux respectifs vers une feuille de calcul à l’aide de l’éditeur de tableaux pour une analyse statistique plus approfondie. Le traitement par lipopolysaccharides a induit une augmentation de l’acétylation de l’histone 3 lysine 27. Lorsque l’IMF est normalisée dans le sexe, l’analyse de l’histogramme des cellules colorées a montré des populations normalement distribuées avec des changements cellulaires vers une fluorescence accrue.
Une augmentation similaire de l’acétylation de l’histone 3 lysine 27 a été observée dans les cellules colorées.
