Préparez les moules d’enrobage en créant des feuilles d’étain cylindriques pour chaque échantillon. Remplissez les moules avec une température de coupe optimale ou un composé OCT. Préparez ensuite deux barils d’isolation.
Remplissez le petit baril d’isopentane et le grand baril d’azote liquide. Placez le petit baril à l’intérieur du plus grand 10 minutes avant la dissection musculaire. Commencez par préparer la souris pour la dissection.
Ouvrez la peau du visage de la souris pour exposer le muscle masséter. Retirez les glandes parotides pour exposer complètement la partie postérieure du muscle masséter. Disséquez le muscle masséter de son attache antérieure jusqu’à son attache postérieure sur la mandibule.
Ensuite, immergez le tissu musculaire dans l’OCT, en le tenant perpendiculairement au composé. Transférez le moule dans l’isopentane pré-refroidi à l’aide d’un porte-aiguille. Attendez 40 secondes jusqu’à ce que l’OCT devienne blanc et fixe.
Conservez les échantillons de muscle frais congelés dans des plaques étiquetées à 24 puits. Sectionnez immédiatement les échantillons à 20 degrés Celsius ou stockez-les à 80 degrés Celsius pour une utilisation à long terme. Ensuite, ouvrez la peau de la cheville au genou et retirez le fascia pour exposer le muscle tibial antérieur.
Utilisez la pointe de la pince de microdissection pour isoler le tendon du tibial antérieur et faites-le glisser jusqu’au genou pour casser les fibres attachées au tibia. Coupez le tendon à la cheville. La coloration HE et sirius red a révélé qu’après une blessure par gel, le muscle tibial antérieur a montré une régénération complète après 14 jours avec une morphologie similaire à un contrôle intact.
En revanche, le muscle masséter présentait une régénération des myofibres altérée et un dépôt excessif de matrice extracellulaire après 14 jours de lésion par le gel. La coloration immunohistologique de Pax7 après 14 jours de blessure a montré des noyaux densément peuplés, mais sans augmentation proportionnelle des cellules satellites musculaires. Un grand nombre de myofibres situées au centre ont été détectées dans le muscle tibial antérieur 14 jours après la blessure, tandis que le contour des myofibres était à peine perceptible dans le muscle masséter dans la zone blessée.
Au lieu de cela, l’infiltration de FAP PDGFRalpha-positifs a été observée.
