Pour commencer, déplacez les chiots dans une cage séparée loin de la mère pendant que vous les manipulez. Avant de commencer la procédure d’injection, à l’aide du microscope à dissection, confirmez l’espace intervertébral, ou au minimum, la ligne médiane du canal rachidien du chiot. Chargez une seringue de 25 ou 10 microlitres avec 10 microlitres de la substance injectable souhaitée comme la formulation du médicament, la préparation du virus ou le liquide céphalo-rachidien artificiel de contrôle, etc.
Une fois que l’animal est complètement anesthésié, comme le confirme une réduction ou une absence de mouvement du corps, placez doucement les chiots sous le microscope. Avec l’index et le pouce gauches, palper soigneusement l’espace intervertébral le long de la ligne médiane, situé entre les ceintures pelviennes bilatérales. Faites légèrement pivoter la base de la queue pour aider à identifier la ligne médiane de la colonne vertébrale.
Insérez soigneusement l’aiguille en l’inclinant à un angle de 70 à 80 degrés au point d’intersection de l’indentation tout en veillant à ce qu’elle reste alignée avec le plan sagittal central. Au fur et à mesure que l’aiguille entre en contact avec l’os, diminuez progressivement l’angle jusqu’à environ 30 degrés et avancez l’aiguille d’environ deux millimètres dans l’espace intervertébral. Injectez lentement jusqu’à 10 microlitres de volume en 50 à 60 secondes.
Gardez l’aiguille en place pendant 10 à 20 secondes après l’injection. Retirez l’aiguille avec une rotation douce pour éviter les fuites. Après l’injection, placez le chiot sur un coussin chauffant pendant 10 à 15 minutes pour lui permettre de récupérer complètement et de se réchauffer.
L’administration d’une injection intrathécale de vert rapide chez des nouveau-nés de type sauvage a immédiatement entraîné une large distribution de la solution administrée. Les souris rapporteures YFP ont montré une expression généralisée de YFP dans l’ensemble du cerveau 10 jours après l’injection intrathécale de l’édition de gènes basée sur CRISPR-Cas9.
